人類神經(jīng)母細胞瘤骨侵襲模型的建立及PTHLH蛋白在其中的表達.pdf

1、目的:神經(jīng)母細胞瘤(Neuro blastoma,NB)是兒章最常見的顱外實體腫瘤,是嬰兒時期診斷的最常見的新生腫物。NB占15歲以下惡性腫瘤病例的6-10%,占所有兒科腫瘤死亡病例的15%[2]。探討如何建立適合長期研究與治療的人類神經(jīng)母細胞瘤(NB)骨侵襲的動物模型以及骨侵襲相關因子PTHLH蛋白在其中的表達,對臨床研究NB的侵襲相關有重要的指導意義。
　　 方法:收集10代以內處于對數(shù)生長期SH-SY5Y腫瘤細胞,機械分離

2、制成單細胞懸液,以無血清培養(yǎng)基重懸細胞,調整細胞密度,然后采用骨髓腔內注射與肌肉內注射的方法分別種植到無胸腺裸鼠體內。待局部成瘤后,應用外科手術方法將腫瘤及其周圍組織取材,經(jīng)甲醛固定,脫鈣,石蠟包埋,切片等步驟后,采用免疫組化的方法比較骨髓腔內成瘤和肌肉內成瘤中PTHLH的表達。分別收集SH-SY5Y細胞及2種成瘤方式的腫瘤組織,充分破碎后,提取其中的蛋白質,應用Western-Blot的方法檢測PTHLH蛋白在其中的表達。
　　

3、 結果:
　　 1、SH-SY5Y細胞系細胞在骨髓內直接種植在全部試驗動物中可以侵襲骨質形成溶骨性病變:
　　 2、SH-SY5Y細胞系細胞肌肉內直接種植在全部試驗動物中可以形成腫瘤,但無法侵襲骨質形成融骨性改變。
　　 3、免疫組化結果顯示所成的腫瘤中均有PTHLH蛋白的表達,定位于胞漿。在骨髓內成瘤的組織內表達量較多。
　　 4、Western-Blot結果顯示PTHLH的蛋白含量骨髓內成瘤最高,肌