Toll樣受體交叉對話和細胞相互作用在失血性休克誘導急性肺損傷中的作用及機制研究.pdf

1、第二部分：研究中性粒細胞NADPH氧化酶產生的活性氧對失血性休克活化內皮細胞NADPH氧化酶的作用及機制，并獲得以下重要發(fā)現(xiàn)：
　　1.失血性休克對肺組織和中性粒細胞NADPH氧化酶的影響。
　　為了明確失血性休克對肺組織NADPH氧化酶的作用，我們檢測TLR4突變小鼠和野生型小鼠失血性休克后，肺組織和中性粒細胞NADPH氧化酶的活化程度。結果顯示，失血性休克通過HMGB1-TLR4激活肺組織和中性粒細胞NADPH氧化酶。<

2、br>　　2.失血性休克時，中性粒細胞對肺組織NADPH氧化酶活性的影響。
　　我們在去除中性粒細胞小鼠模型的基礎上再行失血性休克，小鼠復蘇時補充經過失血性休克刺激的中性粒細胞(分別來自于gp91-/-敲基因小鼠和野生型小鼠)，檢測肺組織NADPH氧化酶的活性。結果發(fā)現(xiàn)，失血性休克激活的中性粒細胞NADPH氧化酶促進肺組織NADPH氧化酶的活化。
　　3.中性粒細胞對肺血管內皮細胞NADPH氧化酶活性的影響。
　　將g

3、p91-/-敲基因小鼠和野生型小鼠肺血管內皮細胞與gp91-/-或野生型小鼠的中性粒細胞共培養(yǎng)，并給予HMGB1刺激，檢測內皮細胞中NADPH氧化酶的活性。結果顯示，HMGB1和中性粒細胞NADPH氧化酶產生的活性氧促進內皮細胞NADPH氧化酶的活化。
　　4.Racl、p38MAPK信號轉導通路參與HMGB1激活內皮細胞的NADPH氧化酶。
　　用Racl、Akt和p38有絲分裂原激活蛋白激酶抑制劑刺激肺血管內皮細胞，隨后

4、給予HMGB1。檢測血管內皮細胞NADPH氧化酶的活性。結果發(fā)現(xiàn)，Racl和p38MAPK抑制劑顯著下調HMGB1誘導肺血管內皮細胞中NADPH氧化酶的活性。
　　5.Racl信號轉導通路參與HMGB1和活性氧增強內皮細胞NADPH氧化酶的活性。
　　用Racl、Akt和p38有絲分裂原激活蛋白激酶抑制劑刺激肺血管內皮細胞，隨后給予HMGB1伴有H2O2共孵育。檢測血管內皮細胞NADPH氧化酶的活性。結果發(fā)現(xiàn)，只有Racl抑

5、制劑能夠降低肺血管內皮細胞中NADPH氧化酶的活性。
　　綜上所述，我們獲得以下結論：
　　1.失血性休克時，HMGB1通過TLR4-MyD88-NFκB通路調控肺血管內皮細胞TLR2的表達。
　　2.失血性休克不同時期，HMGB1促進肺組織IRAK4、NFκB、NADPH氧化酶活性和ICAM1的表達依次依賴于TLR4和TLR2通路。
　　3.TLR4繼發(fā)上調的TLR2擴大了肺組織識別外源性刺激物的范圍，延長了肺

6、損傷的時程和加重損傷的程度。
　　4.失血性休克通過HMGB1-TLR4活化肺組織和中性粒細胞NADPH氧化酶。
　　5.失血性休克激活的中性粒細胞通過活化自身NADPH氧化酶促進肺組織和肺血管內皮細胞NADPH氧化酶的活性。
　　6.HMGB1活化內皮細胞涉及到Racl和p38MAPK信號通路；而伴有活性氧增強肺血管內皮細胞NADPH氧化酶的過程僅有Racl通路。
　　本研究發(fā)現(xiàn)了失血性休克繼發(fā)急性肺損傷時，通