腺伴隨病毒載體轉導骨髓間充質干細胞的基因治療新途徑研究.pdf

1、目的:腺伴隨病毒載體是目前進行的基因治療探索中唯一安全性和療效穩(wěn)定的病毒載體。其血清型有8種，不同的血清型由于其包殼蛋白的不同而對不同的組織細胞有不同的感染效率。目前對其感染進入細胞的機制仍不清楚，而應用較多的是血清型2型腺伴隨病毒載體。骨髓間充質干細胞作為一種成體干細胞，來源于骨髓，對于維持骨髓的造血微環(huán)境及機體的造血功能起著非常重要的作用。它經體外分離培養(yǎng)增殖后，20代內其干細胞的特性不發(fā)生改變，同時體外擴增培養(yǎng)的骨髓間充質干細胞經

2、過靜脈回輸后，可回巢定位到造血器官如：骨髓、肝、脾等部位。且諸多證據證明骨髓間充質干細胞在體外可被作為基因轉染的靶細胞。而目前應用腺伴隨病毒載體對骨髓間充質干細胞進行基因轉染的研究尚未展開。重組人粒巨噬細胞集落刺激因子，在血液系統(tǒng)疾病的治療中廣為應用。能否將重組腺伴隨病毒載體和骨髓間充質干細胞的特點結合起來，使粒巨噬細胞集落刺激因子能夠長期穩(wěn)定的在體內表達?因此，設想將重組人粒巨噬細胞集落刺激因子基因和鼠粒巨噬細胞集落刺激因子基因作為靶

3、基因，克隆到重組腺伴隨病毒載體上，探索帶有重組人粒巨噬細胞集落刺激因子基因和鼠粒巨噬細胞集落刺激因子基因的重組腺伴隨病毒載體在體外能否有效轉導到人骨髓間充質干細胞。并觀察其在體外，和體內的表達情況。從而，為腺伴隨病毒載體和骨髓間質干細胞在惡性血液病的基因治療方面的應用做一點探索性工作。 結論: 1、來源于白血病病人的骨髓間充質干細胞與來源于正常健康成人的骨髓間充質干細胞從本質上無差別。作為細胞治療及基因治療的良好載體有望以后

4、應用于臨床； 2、重組腺伴隨病毒載體對骨髓間充質干細胞的轉染效率低，經過重組腺伴隨病毒載體轉移的基因可在體外長期表達，但隨著細胞傳代逐漸衰減。經回輸體內后有望獲得長期穩(wěn)定表達。這一技術是基因治療，尤其是對惡性血液病治療的一條新途徑。但目前阻礙其進一步應用的壁壘可能是其低的體外轉染效率； 3、經過重組腺伴隨病毒載體轉導的來源于急性髓性白血病患者骨髓的間充質干細胞，仍具有其多向分化能力，經過體外培養(yǎng)擴增回輸裸鼠體內后，裸鼠未發(fā)生