轉錄因子FOXM1的核酸適配體篩選與應用.pdf

1、人類FOXM1蛋白屬于Forkhead Box(Fox)轉錄因子家族，到目前為止這個家族在人類基因組中擁有至少50個成員，分別參與調節(jié)了細胞的分化、增殖、代謝與凋亡等生理過程，同時還對腫瘤發(fā)生和發(fā)展具有重要意義。FOXM1是一個與細胞增殖相關的轉錄因子，它被發(fā)現在人類的多種腫瘤細胞中都存在較高的表達水平，表明FOXM1與多種癌癥的發(fā)生密切相關，如肝癌、肺癌、前列腺癌和乳腺癌等。因此，對FOXM1的深入研究將有助于進一步揭示腫瘤發(fā)生的發(fā)病

2、機理，并為抗腫瘤藥物的研發(fā)提供可能的新靶點。
　　 針對蛋白功能研究，目前傳統方法多采用抗體免疫手段。近年來核酸適配體在生物分析、疾病診斷、治療、藥物篩選等方面的應用引起了人們極大的興趣，以核酸適配體取代抗體利用ELISA和流式細胞技術檢測蛋白質的表達，可以比使用抗體獲得更高的靈敏度。同時核酸適配體可以通過核酸化學方法進行制備，經過相應的修飾及生物功能化，能夠達到對生物大分子、細胞等生物靶標的選擇性檢測、定位和其生物功能的調控。

3、由于具有以上特點，核酸適配體在生物醫(yī)學基礎研究和臨床診斷與治療方面顯示出巨大的應用前景。
　　 本文以重組的GST-FOXM1融合蛋白作為靶蛋白，GST蛋白作為反篩蛋白，以包含有77個堿基的隨機單鏈DNA寡核酸庫作為初始庫，經過7輪篩選，獲得了1條與靶蛋白FOXM1高特異性與高親和力結合的單鏈DNA核酸適配體JX42，該適配體與FOXM1的解離常數Kd達到225 nM。進一步研究發(fā)現核酸適配體JX42在復雜體系中也可以特異性地識