ODC和AdoMetDC雙反義RNA腺病毒載體抑制食管癌細胞的增殖和侵襲.pdf

1、多胺包括精胺、精瞇和腐胺，是調(diào)節(jié)細胞生長的重要物質(zhì)，它可以通過改變DNA結(jié)構(gòu)和調(diào)節(jié)信號傳導途徑等方式調(diào)節(jié)基因的表達，從而在細胞生長和分化過程中發(fā)揮著重要的作用。有研究發(fā)現(xiàn)，在食管的腫瘤細胞和組織中多胺的含量和生物合成明顯增高。如果能有效減弱多胺在腫瘤細胞中的過度表達，則可抑制腫瘤細胞的生長。因而研究抑制多胺合成的關(guān)鍵酶的方法就成了近來癌癥治療的熱點。鳥氨酸脫羧酶（ODC）和S－腺苷甲硫氨酸脫羧酶（AdoMetDC）是多胺生物合成的關(guān)鍵酶

2、。在成功構(gòu)建并擴增出ODC和AdoMetDC雙反義RNA腺病毒載體的基礎(chǔ)之上。研究鳥氨酸脫羧酶（ODC）和S－腺苷甲硫氨酸脫羧酶（AdoMetDC）雙反義RNA腺病毒對食管癌細胞增殖和侵襲的抑制作用。 研究目的:探討鳥氨酸脫羧酶（ODC）和S－腺苷甲硫氨酸脫羧酶（AdoMetDC）雙反義腺病毒載體（Ad-ODC-AdoMetDCas）對人食管癌Eca109細胞多胺合成、細胞增殖和侵襲的抑制作用。 研究方法: 1、

3、構(gòu)建并擴增出ODC和AdoMetDC雙反義RNA腺病毒載體； 2、重組腺病毒Ad-ODC-AdoMetDCas感染Eca109細胞的效率的測定：采用不同的MOI Ad-GFP感染Eca109細胞，用來檢測腺病毒介導的基因轉(zhuǎn)染效率； 3、采用活細胞計數(shù)法實驗觀察Ad-ODC－AdoMetDCas對食管癌Eca109細胞生長增殖的影響； 4、應(yīng)用Western印跡和高效液相色譜分析法（HPLC）分別檢測雙反義RNA腺

4、病毒對食管癌Eca109細胞中ODC和AdoMetDC蛋白表達，以及胞內(nèi)多胺合成的抑制作用； 5、采用Matrigel侵襲實驗分析腺病毒載體對Eca109細胞侵襲活性的改變； 6、應(yīng)用裸鼠皮下移植瘤模型觀察Ad－ODC-AdoMetDCas對移植食管癌Eca109細胞增殖的抑制作用。 研究結(jié)果: 1、成功構(gòu)建并擴增出ODC和AdoMetDC雙反義RNA腺病毒載體； 2、當感染效率為50時，腺病毒對

5、Eca109細胞感染率為75％，所以后續(xù)實驗中的MOI確定為50； 3、活細胞計數(shù)法表明，Ad-ODC-AdoMetDCas對食管癌Eca109細胞生長增殖有明顯抑制作用； 4、Western印跡證實Ad－ODC－AdoMetDCas可明顯抑制Eca109細胞中ODC和AdoMetDC蛋白的表達；高效液相色譜分析法（HPLC）結(jié)果顯示，Eca109細胞感染Ad-ODC-AdoMetDCas后細胞內(nèi)腐胺、精胺、精脒等三種多

6、胺含量都明顯降低； 5、Matrigel侵襲實驗結(jié)果顯示，Ad-ODC-AdoMetDCas可顯著降低Eca109細胞的體外侵襲能力； 6、體內(nèi)實驗顯示，Ad-ODC-AdoMetDCas雙反義RNA腺病毒載體對已形成的裸鼠皮下移植瘤具有明顯的抑制作用。 研究結(jié)論:鳥氨酸脫羧酶（ODC）和S-腺苷甲硫氨酸脫羧酶（AdoMetDC）雙反義RNA重組腺病毒能顯著抑制食管癌Eca109細胞的增殖和侵襲，具有食管癌基因治