曲妥珠單抗誘導(dǎo)大鼠心功能降低及其機(jī)制的探討.pdf

1、目的：曲妥珠單抗是靶向結(jié)合表皮生長(zhǎng)因子受體2（human epidermal growth factor receptor2，HER2）胞外結(jié)構(gòu)域的人源化單克隆抗體，已成為HER2受體過(guò)表達(dá)乳腺癌治療的主要靶向治療藥物，可明顯提高患者的生存率。然而，有臨床研究報(bào)道，曲妥珠單抗能造成患者左室收縮功能下降，并可能發(fā)展成充血性心力衰竭，其具體機(jī)制尚不明確。而且到目前為止，未見(jiàn)有文獻(xiàn)報(bào)道復(fù)制該動(dòng)物模型的適宜方法。因此，建立可靠的曲妥珠心臟損害的

2、動(dòng)物模型，對(duì)于研究曲妥珠心肌病的發(fā)病機(jī)制和防治策略，以及探討同類(lèi)靶向藥物可能潛在心肌毒性，指導(dǎo)此類(lèi)基因靶向藥物的臨床安全應(yīng)用具有重要的意義。為此，本課題主要目的是觀察腹腔注射曲妥珠單抗對(duì)大鼠心功能的影響，探索曲妥珠單抗誘導(dǎo)心力衰竭的動(dòng)物模型的制作方法，并初步探討其可能的機(jī)制。
　　方法：
　　(1)6周齡Wistar雄性大鼠20只，隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組(n=10)和對(duì)照組(n=10)。
　　(2)實(shí)驗(yàn)組大鼠腹腔注射曲妥珠單抗

3、，第一天以12mg/kg給藥，此后每天以6mg/kg給藥，共7天，累計(jì)總量48mg/kg;對(duì)照組大鼠腹腔注射等量生理鹽水。
　　(3)給藥前和末次給藥后行心臟彩色多普勒超聲檢測(cè)，測(cè)量:①左室后壁和室間隔舒張末期厚度(LVPWd、IVSd);②左室舒張和收縮末期內(nèi)徑(LVEDd、LVESd);③左室后壁和室間隔收縮期厚度(LVPWs、IVSs);④左室射血分?jǐn)?shù)LVEF≈(LVEDd3-LVESd3)/LVEDd3×100％、短軸縮短

4、率LVFS=(LVEDd-LVESd)/LVEDd×100％。
　　(4)DNA原位末端缺口標(biāo)記技術(shù)（TUNEL法）檢測(cè)細(xì)胞凋亡并計(jì)算凋亡指數(shù);分光光度法測(cè)定Caspase-3活性。
　　(5)實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(Real-TimePCR)檢測(cè)纖維化因子DDR2和S100A4mRNA的表達(dá)。
　　(6)所有計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（(x)±s）表示，采用SPSS20.0軟件包對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，組間比較采用兩樣本t檢驗(yàn)

5、，α=0.05為檢驗(yàn)水準(zhǔn);繪制散點(diǎn)圖后，行兩變量間Pearson相關(guān)性分析，以P=0.05作為相關(guān)系數(shù)的檢驗(yàn)水準(zhǔn)。
　　結(jié)果：
　　(1)給藥前，兩組大鼠心臟超聲各指標(biāo)均無(wú)明顯差異;給藥后，與對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組大鼠左室內(nèi)徑擴(kuò)大，左室后壁厚度變薄，左室射血分?jǐn)?shù)降低，左室短軸縮短率下降。各指標(biāo)差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.05）。
　　(2)與對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組大鼠心肌細(xì)胞陽(yáng)染細(xì)胞核顯著增多，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.

6、001)。
　　(3)與對(duì)照組比較，實(shí)驗(yàn)組大鼠左心室心肌組織Caspase-3活性增強(qiáng)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.001)。
　　(4)實(shí)驗(yàn)組，心肌組織Caspase-3活性與舒張期左室后壁厚度呈負(fù)相關(guān)（r=0.832，P＜0.05），與左室射血分?jǐn)?shù)呈負(fù)相關(guān)（r=0.756，P＜0.05）。
　　(5)與對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組大鼠心肌組織中DDR2和S100A4無(wú)明顯變化（P＞0.05）。
　　結(jié)論：
　　(