影響富血小板血漿凝膠生物效應(yīng)因素的體外實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、背景及目的：
　　 富血小板血漿生物效應(yīng)的發(fā)揮受多種因素的影響，如PRP制備的方法、血小板的完整性、抗凝劑及激活劑的選擇等。我們旨在尋找二次離心法制備富血小板血漿最佳離心方案，并比較不同抗凝劑與激活劑組合應(yīng)用對富血小板血漿釋放生長因子的差異。
　　 方法：
　　 1.抽取新西蘭兔全血，分別采用3種離心方法制備富血小板血漿。A組：2400轉(zhuǎn)/分離心10分鐘、3600轉(zhuǎn)/分離心15分鐘；B組：2000轉(zhuǎn)/分離心10分

2、鐘、3000轉(zhuǎn)/分離心15分鐘；C組：3000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘、4000轉(zhuǎn)/分離心15分鐘。比較血小板計(jì)數(shù)和血小板回收率結(jié)果來選擇最佳離心方案。
　　 2.抽取新西蘭兔全血分別以依地酸鈉鈣(EDTA)和肝素鈉(HS)抗凝，采用最佳離心方案來制備PRP(富血小板血漿)；分別計(jì)數(shù)全血和各組PRP血小板數(shù)目，并計(jì)算各組PRP血小板回收率。用牛凝血酶和I型膠原激活各組PRP，在激活富小板血漿后2小時(shí)、1天、3天、5天使用酶聯(lián)免疫吸附法

3、測定全血和各組合PRP凝膠中轉(zhuǎn)移生長因子(TGF-β1)及血小板源性生長因子(PDGF-AB)的濃度，比較各組間兩種生長因子釋放方式和濃度的差異。
　　 結(jié)果：
　　 1.A組離心方法PRP血小板計(jì)數(shù)1315.14×109/L，是全血血小板計(jì)數(shù)的5.85倍，血小板回收率為70.28%；B組離心方法PRP血小板計(jì)數(shù)1005.32×109/L，是全血血小板計(jì)數(shù)的4.48倍，血小板回收率為53.73%；C組離心方法PRP血小板

4、計(jì)數(shù)850.12×109/L，是全血血小板計(jì)數(shù)的3.78倍，血小板回收率為45.53%。A組離心方法制備的PRP血小板計(jì)數(shù)和血小板回收率明顯高于B組和C組，A組、B組、C組三種離心方法之間血小板計(jì)數(shù)和血小板回收率比較差異有顯著性意義(P<0.05)。
　　 2.使用EDTA作為抗凝劑制備的PRP血小板計(jì)數(shù)是全血的5.8倍左右，血小板回收率為69.81%；使用肝素鈉作為抗凝劑制備的PRP血小板計(jì)數(shù)是全血的4.13倍左右，血小板回收

5、率為49.61%。EDTA與Ⅰ型膠原組合制備的PRP凝膠中轉(zhuǎn)化生長因子(TGF-β1)和血小板源性生長因子(PDGF-AB)累積釋放量最大，與其它各組比較有顯著性差異(P<0.05)；并發(fā)現(xiàn)使用Ⅰ型膠原作為激活劑的PRP凝膠中TGF-β1和PDGF-AB兩種生長因子的釋放方式都是持續(xù)穩(wěn)定緩慢的，并且轉(zhuǎn)化生長因子(TGF-β1)與激活時(shí)間呈正相關(guān)關(guān)系r=0.873)；而凝血酶激活的PRP凝膠釋放生長因子的速度則較為快速。
　　 結(jié)

6、論：
　　 1.2400轉(zhuǎn)/分離心10分鐘、3600轉(zhuǎn)/分離心15分鐘可能是制備富血小板血漿的最佳離心方案。
　　 2.使用依地酸鈉鈣與Ⅰ型膠原制備的富血小板血漿凝膠所釋放生長因子的濃度較大，生長因子的釋放方式是持續(xù)穩(wěn)定緩慢釋放的；其釋放生長因子的濃度與方式可能更利于組織工程髓核中種子細(xì)胞的生長分化和對退變椎間盤的治療和修復(fù)。
　　 綜上所述
　　 2400轉(zhuǎn)/分離心10分鐘、3600轉(zhuǎn)/分離心15分鐘的