普通變形桿菌TWN-3株基因文庫構建及免疫印跡篩選.pdf

1、長期以來，對水產疫病的控制主要依靠使用各種抗生素和化學藥物，但大量使用藥物產生的藥物殘留問題與對食品品質與安全日益嚴格的要求這對矛盾越發(fā)突出。近年來，我國水產品因為藥物殘留超標而多次出口受阻就是慘痛的教訓。不僅造成了巨大的經濟損失，而且嚴重打擊了養(yǎng)殖戶的生產積極性，影響水產養(yǎng)殖業(yè)進一步發(fā)展。1991年，Hansen等首先報道了外源基因能夠在鯉魚肌肉組織中表達。1996年，Anderson等第一次報告了帶有傳染性造血組織壞死癥病毒(Inf

2、ectious haematopoietic necrosis virus，IHNV)糖蛋白基因的質粒能夠在虹鱒中表達，并且能夠保護IHNV病毒對受免疫魚的感染。隨后的一些實驗也證明，在多種魚體內，外源基因不僅能夠高效，持久地表達，而且能夠引起宿主魚類對外源蛋白的免疫應答。這些為構建魚類DNA疫苗提供了理論基礎。同時對魚病防治指出了一個新的途徑。通過有計劃的對養(yǎng)殖魚類的主要疾病進行疫苗接種可以大大減少抗生素等化學藥物在養(yǎng)殖魚類上的使用量

3、。提高水產品品質和食用安全性，促進我國水產品出口創(chuàng)匯。 普通變形桿菌(Proteus．vulgaris)廣泛存在于自然界，是一種條件致病菌。由該菌引發(fā)的人類疾病國內有較多報道，此類菌對蝦、蟹、赤點石斑魚、鱷魚等水生生物均具有感染性甚至致死，其中不少品種是水產經濟動物。本實驗室成功從大口鲇病魚體內分離出普通變形桿菌TWN-3株，經研究發(fā)現其pH和鹽的耐受度強，在適宜生長溫度范圍內生長十分迅速，因此十分容易造成爆發(fā)性疾病，對水產養(yǎng)殖

4、生產是一種潛在的威脅。同時研究還發(fā)現，該菌株對許多抗生素都不敏感，因此一旦發(fā)病，目前的常規(guī)魚病防治手段難以取得明顯的效果。嘗試用DNA疫苗的方法對其進行預防不失為一個有益的嘗試。成功構建DNA疫苗的必須獲得相應抗原的主要保護性抗原基因。本研究用帶有普通變形桿菌TWN-3株總DNA片段的重組pUC18質粒轉化大腸桿菌BL21感受態(tài)細胞，構建普通變形桿菌TWN-3株DNA文庫，獲得了3.6×10<'3>個帶有插入片段的重組子。根據Clark