內(nèi)皮特異性分子-1在慢性阻塞性肺疾病中的變化和可能的作用.pdf

1、第一章：肺氣腫小鼠模型的建立與評價
　　 目的：探討經(jīng)腹腔注射香煙提取物(cigarette smoke extract，CSE)建立肺氣腫小鼠模型，并評價模型的病理改變，肺功能，細(xì)胞凋亡，蛋白酶表達(dá)，抗氧化能力。
　　 方法：21只SPF級BALB/C小鼠隨機分為PBS組(n=7)和CSE組(n=14)，制備香煙提取物。兩組分別在0，11，22天經(jīng)腹腔注射0.3m1PBS或CSE，第28天處理兩組小鼠，收集標(biāo)本。

2、>　　 PLY3211小動物肺功能檢測系統(tǒng)進(jìn)行小鼠肺功能檢查；采用靜脈留置針行灌洗術(shù)留取支氣管肺泡灌洗液(BALF)，并用終點比色法檢測BALF總抗氧化能力(T-AOC)；肺組織病理切片蘇木素-伊紅(HE)染色后觀察形態(tài)學(xué)改變并定量測定肺泡平均截距(MLI)，肺泡破壞指數(shù)(DI)和平均肺泡隔厚度(MAST)；末端轉(zhuǎn)移酶標(biāo)記技術(shù)(TUNEL法)測定肺組織細(xì)胞凋亡指數(shù)(AI)；免疫組織化學(xué)法測定肺組織MMP-2和MMP-9表達(dá)。
　

3、　 結(jié)果：
　　 (1)與PBS組比較，CSE組小鼠動態(tài)肺順應(yīng)性減低(p<0.05)，氣道阻力升高(p<0.05)。
　　 (2)病理學(xué)觀察示：CSE組小鼠肺組織肺泡腔擴大、部分肺泡間隔斷裂、肺氣腫形成，氣道上皮排列紊亂、部分氣道上皮增生、周圍炎癥細(xì)胞浸潤并伴有平滑肌增生。部分小血管管腔狹窄，甚至閉鎖，血管壁增厚，平滑肌增殖。
　　 病理形態(tài)學(xué)定量分析顯示：與PBS組比較，CSE組小鼠肺泡平均截距及肺泡破壞指數(shù)

4、增高(均p<0.05)，平均肺泡隔厚度減少(p<0.05)。
　　 (3)與PBS組比較，CSE組小鼠肺組織細(xì)胞凋亡率升高(p<0.05)。
　　 (4)與PBS組比較，CSE組小鼠肺組織MMP-2及MMP-9表達(dá)增高(p<0.05)。
　　 (5)與PBS組比較，CSE組小鼠支氣管肺泡灌洗液抗氧化能力減低(p<0.05)。
　　 結(jié)論：經(jīng)腹腔注射CSE可以建立肺氣腫小鼠模型，該模型穩(wěn)定可靠，與人類慢性阻

5、塞性肺疾病高度相似。
　　 第二章：肺氣腫小鼠模型中內(nèi)皮特異性分子-1的變化情況及其與肺組織結(jié)構(gòu)細(xì)胞凋亡的相關(guān)性分析
　　 目的：探討內(nèi)皮特異性分子-1(Endothelial cell specificmolecule-1，ESM-1)在經(jīng)腹腔注射香煙提取物所致慢性阻塞性肺疾病小鼠中的變化情況，了解其與肺組織結(jié)構(gòu)細(xì)胞凋亡的相關(guān)性。
　　 方法：21只6周雄性SPF級BALB/C小鼠隨機分為2組：PBS組，CSE

6、組。PBS組7只，CSE組14只。分別在0，11，22天經(jīng)腹腔注射PBS/CSE，第28天處死小鼠。留取肺組織，凍存在-86℃冰箱中，提取組織蛋白，采用Western Blotting法檢測肺組織ESM-1的表達(dá)。肺組織包埋切片，用免疫組織化學(xué)法檢測肺組織ESM-1原位表達(dá)情況。用ELISA法測定小鼠血清ESM-1濃度。
　　 結(jié)果：
　　 (1)與PBS組比較，CSE組小鼠肺組織ESM-1表達(dá)(WesternBlott

7、ing)降低(p<0.05)。
　　 (2)與PBS組比較，CSE組小鼠肺組織ESM-1表達(dá)(免疫組織化學(xué)法)降低(p<0.05)。
　　 (3)與PBS組比較，CSE組小鼠血清ESM-1濃度降低(P<0.05)。
　　 (4)肺組織細(xì)胞凋亡指數(shù)(AI)與肺組織ESM-1表達(dá)(WesternBlotting法)(r=-0.998，p<0.001)呈負(fù)相關(guān)，與血清ESM-1濃度呈負(fù)相關(guān)(r=-0.774，p<0.0

8、5)。
　　 結(jié)論：本研究證明了肺氣腫小鼠肺組織ESM-1的表達(dá)以及血清濃度降低，且與AI呈負(fù)相關(guān)。ESM-1可能參與了COPD細(xì)胞凋亡/修復(fù)失衡機制。
　　 第三章：慢性阻塞性肺疾病患者中內(nèi)皮特異性分子-1的變化情況及其與肺組織結(jié)構(gòu)細(xì)胞凋亡的相關(guān)性分析
　　 目的：探討內(nèi)皮特異性分子-1(Endothelial cell specificmolecule-1，ESM-1)在慢性阻塞性肺疾病(Chronic ob

9、structivepulmonary disease，COPD)患者體內(nèi)的變化情況，了解其與肺組織結(jié)構(gòu)細(xì)胞凋亡及肺功能的相關(guān)性。
　　 方法：收集COPD患者及正常人的肺組織、血清。肺組織分組：A組：非吸煙非COPD者；B組：吸煙并COPD組(穩(wěn)定期輕度)；C組：吸煙并COPD患者(穩(wěn)定期中度)。血清分組：D組：健康不吸煙者：E組：吸煙并COPD組(穩(wěn)定期中度)；F組：吸煙并COPD患者(穩(wěn)定期重度)；G組：吸煙并COPD患者(

10、穩(wěn)定期極重度)。肺組織病理切片蘇木素-伊紅(HE)染色后觀察形態(tài)學(xué)改變并定量測定肺泡平均截距(MLI)，肺泡破壞指數(shù)(DI)和平均肺泡隔厚度(MAST)；末端轉(zhuǎn)移酶標(biāo)記技術(shù)(TUNEL法)測定肺組織細(xì)胞凋亡指數(shù)(AI)；免疫組織化學(xué)法檢測肺組織ESM-1原位表達(dá)情況。ELISA法測定人血清ESM-1濃度。
　　 結(jié)果：
　　 (1)病理學(xué)觀察示：B組及C組人肺組織肺泡腔擴大、部分肺泡間隔斷裂、肺氣腫形成，氣道上皮排列紊亂

11、、部分氣道上皮增生、周圍炎癥細(xì)胞浸潤并伴有平滑肌增生。部分小血管管腔狹窄，甚至閉鎖，血管壁增厚，平滑肌增殖。
　　 病理形態(tài)學(xué)定量分析顯示：B組及C組MLI較A組明顯增高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.05)。C組MLI較B組明顯增高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.05)。B組及C組DI較A組明顯增高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.05)。C組DI較B組明顯增高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.05)。B組及C組MAST較A組明顯降低，差異有統(tǒng)計

12、學(xué)意義(p<0.05)。C組MAST較B組明顯降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.05)。
　　 (2)B組及C組凋亡細(xì)胞指數(shù)(AI)較A組明顯增高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.05)。C組AI較B組明顯增高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.05)。
　　 (3)B組及C組ESM-1蛋白表達(dá)較A組明顯降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.05)。C組ESM-1蛋白表達(dá)較B組明顯降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.05)。
　　 (4)

13、E組、F組、G組血清ESM-1濃度較D組明顯降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.05)。F組、G組血清ESM-1濃度較E組明顯降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.05)。G組血清ESM-1濃度較F組明顯降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.05)。
　　 (5)肺組織細(xì)胞凋亡指數(shù)(AI)與肺組織ESM-1表達(dá)(r=-0.886，p<0.001)呈負(fù)相關(guān)。
　　 結(jié)論：本研究證明了COPD患者肺組織ESM-1的表達(dá)以及血清濃度降低，且與