miR-370抑制人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖與遷移的研究.pdf

1、microRNA是一類具有調(diào)控作用的非編碼的RNA分子，近年來的研究表明miRNA可以在轉(zhuǎn)錄后水平對(duì)基因的表達(dá)進(jìn)行調(diào)控，異常表達(dá)的miRNA與腦膠質(zhì)瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。盡管有些異常表達(dá)的miRNAs作用機(jī)制已被闡釋，但關(guān)于miR-370在腦膠質(zhì)瘤的研究尚無報(bào)道。
　　為了探討miR-370在腦膠質(zhì)瘤中的作用，首先應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)對(duì)miR-370在腦膠質(zhì)瘤組織樣品和腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞系中的表達(dá)情況進(jìn)行分析，結(jié)果表明大部分腦膠質(zhì)

2、瘤組織中miR-370的表達(dá)量均低于正常組織，并且miR-370在SHG44、U87及U251三種腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞中的表達(dá)量相對(duì)于正常腦組織亦存在不同程度的下降。采用MTT增殖實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)miR-370過表達(dá)能夠抑制腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖，而抑制miR-370的表達(dá)則對(duì)腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖具有促進(jìn)作用。為了進(jìn)一步探究miR-370的作用機(jī)制，采用PI/Annexin V雙染實(shí)驗(yàn)利用流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞凋亡情況，發(fā)現(xiàn)miR-370過表達(dá)時(shí)可以促進(jìn)腦膠質(zhì)瘤

3、細(xì)胞的凋亡。此外，通過PI染色分析發(fā)現(xiàn)，miR-370對(duì)腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞周期各時(shí)相沒有顯著性影響。細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，過表達(dá)miR-370時(shí)可以抑制腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞的遷移能力，而抑制miR-370表達(dá)時(shí)能夠促進(jìn)腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞的遷移能力。通過生物信息軟件分析發(fā)現(xiàn)DNMT3A可能是miR-370的靶基因，應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR和Western blot實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，miR-370可以調(diào)控DNMT3A在mRNA水平以及蛋白水平的表達(dá)，并且雙熒光素酶報(bào)