miR-29a在膠質(zhì)瘤遷移、侵襲和增殖中的作用研究.pdf

1、第一部分miR-29a在膠質(zhì)瘤細(xì)胞和組織中的表達(dá)
　　目的：分別檢測(cè) miR-29a基因在臨床膠質(zhì)瘤組織和實(shí)驗(yàn)細(xì)胞株中的表達(dá)水平及其與不同級(jí)別膠質(zhì)瘤的關(guān)系。
　　方法：1.通過(guò)提取神經(jīng)小膠質(zhì)細(xì)胞株 N9和星形膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞株 U87的總microRNA,用熒光實(shí)時(shí)定量PCR的方法檢測(cè)miR-29a在這兩種細(xì)胞株中的表達(dá)量。2.通過(guò)收集近2年經(jīng)病理檢查確診的20例臨床膠質(zhì)瘤組織標(biāo)本以及10例患者正常腦組織標(biāo)本（含腦挫裂傷和癲

2、癇患者開(kāi)顱手術(shù)治療者），均分別提取總 RNA；應(yīng)用熒光實(shí)時(shí)定量 PCR的方法檢測(cè)miR-29a在人腦膠質(zhì)瘤組織和正常腦組織中的表達(dá)情況。并進(jìn)一步比較了miR-29a表達(dá)情況與不同級(jí)別膠質(zhì)瘤的相關(guān)性。
　　結(jié)果：1.以神經(jīng)小膠質(zhì)細(xì)胞N9作為對(duì)照，星形膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞株U87中的miR-29的表達(dá)量要顯著高于對(duì)照組的含量(P<0.01）；2.以正常腦組織作為對(duì)照，臨床膠質(zhì)瘤腦組織標(biāo)本中的 miR-29的表達(dá)量也顯著高于對(duì)照組的含量(P

3、<0.01），且臨床分級(jí)越高，其表達(dá)水平越高。
　　結(jié)論： miR-29a在膠質(zhì)瘤細(xì)胞株U87和膠質(zhì)瘤組織中的表達(dá)水平顯著高于正常細(xì)胞和組織。而且miR-29a的表達(dá)水平與其臨床惡性分級(jí)密切相關(guān)，臨床分級(jí)越高，其表達(dá)水平越高。
　　第二部分miR-29a對(duì)U87細(xì)胞遷移、侵襲和增殖的影響
　　目的：觀察 miR-29a對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞株U87遷移、侵襲和增殖能力的影響，為進(jìn)一步探索研究腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞遷移、侵襲和增殖的機(jī)制以及

4、為膠質(zhì)瘤臨床診治提供理論基礎(chǔ)。
　　方法：分別通過(guò)轉(zhuǎn)染 miR-29a模擬物提高 U87細(xì)胞內(nèi) miR-29a的表達(dá)水平，轉(zhuǎn)染miR-29a抑制劑下調(diào)U87細(xì)胞內(nèi)miR-29a的表達(dá)水平；觀察轉(zhuǎn)染了熒光素基團(tuán)標(biāo)記的FAM-SiRNA在熒光顯微鏡下呈現(xiàn)的綠色熒光判斷轉(zhuǎn)染效率；然后通過(guò)熒光實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)分別檢測(cè)兩組轉(zhuǎn)染后U87細(xì)胞中 miR-29a的表達(dá)水平；應(yīng)用細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)、Transwell小室實(shí)驗(yàn)和MTT實(shí)驗(yàn)檢測(cè)miR-29

5、a對(duì)U87膠質(zhì)瘤細(xì)胞的遷移、侵襲以及增值能力的影響。
　　結(jié)果：1.熒光顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)，轉(zhuǎn)染了熒光素基團(tuán)FAM-SiRNA的絕大多數(shù)細(xì)胞都呈現(xiàn)綠色熒光。同時(shí)應(yīng)用熒光實(shí)時(shí)定量PCR方法進(jìn)一步確定轉(zhuǎn)染了miR-29a模擬物和抑制劑后U87細(xì)胞內(nèi)miR-29a的表達(dá)水平。2.轉(zhuǎn)染miR-29a模擬物的U87細(xì)胞在細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)中的遷移能力增強(qiáng)，而轉(zhuǎn)染miR-29a抑制劑的U87細(xì)胞則遷移能力受到抑制。3.轉(zhuǎn)染miR-29a模擬物的 U8

6、7細(xì)胞在Transwell小室實(shí)驗(yàn)即細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)中遷移侵襲的細(xì)胞數(shù)目顯著上升，而轉(zhuǎn)染了miR-29a抑制劑的U87細(xì)胞則遷移侵襲的細(xì)胞數(shù)目顯著減少。4. MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明轉(zhuǎn)染了miR-29a模擬物的U87細(xì)胞的增殖能力顯著增強(qiáng)，而轉(zhuǎn)染了miR-29a抑制劑的U87細(xì)胞的增殖能力則受到顯著的抑制。
　　結(jié)論：1. miR-29a模擬物和抑制劑的轉(zhuǎn)染效率很高，可以有效的上調(diào)或下調(diào)U87細(xì)胞內(nèi)miR-29a的表達(dá)量。2. miR-29