人胚食管上皮細(xì)胞永生化及其惡性轉(zhuǎn)化過程中的染色體異常研究.pdf

1、背景與目的:現(xiàn)已證實(shí)幾乎所有的人體惡性腫瘤都與染色體異常有關(guān)。因此,檢測食管癌的染色體異常有助于闡明食管癌的癌變機(jī)制。HPV18E6E7基因轉(zhuǎn)染人胚食管上皮細(xì)胞建立的永生化細(xì)胞株H5E973具有惡性變趨向,其61代細(xì)胞部分已惡性轉(zhuǎn)化。H5E973細(xì)胞株和在H5E973培養(yǎng)傳代后加入TPA誘導(dǎo)其惡性轉(zhuǎn)化而建立的瘤細(xì)胞株LTPA為體外研究食管癌癌變機(jī)制提供了理想模型。本課題以這2個細(xì)胞株為實(shí)驗(yàn)對象,研究食管上皮細(xì)胞永生化及其惡性轉(zhuǎn)化過程中的

2、染色體變化規(guī)律,為進(jìn)一步研究食管癌的分子細(xì)胞遺傳學(xué)異常提供有價值信息。
　　方法:體外傳代培養(yǎng)H5E973和LTPA細(xì)胞,制備其中期染色體,用胰酶-Giemsa法進(jìn)行G顯帶。分析H5E97326、43、89代和LTPA63代的染色體眾數(shù)變化;對H5E97326、89代和LTPA63代進(jìn)行G顯帶核型分析。此外,利用免疫組化和圖象分析技術(shù)檢測H5E97320、85代及LTPA74代細(xì)胞的HPV18E6、E7蛋白的表達(dá)情況。
　　

3、結(jié)果:H5E97326代、43代、89代眾數(shù)分別為56~62、58~63、61~64,LTPA63代眾數(shù)為59~64。H5E973和LTPA細(xì)胞主要以超二倍體,尤其是亞三倍體為主。伴隨傳代次數(shù)增加,H5E973細(xì)胞眾數(shù)右移,且亞三倍體也呈增多趨勢。12、14、17和20號染色體數(shù)目增加和Y染色體的丟失在H5E97326、89代和LTPA63代均頻繁出現(xiàn)。
　　在H5E973和LTPA主要發(fā)現(xiàn)了18個涉及1、2、4、5、6、7、8、

4、9、10、13、14、19和21號染色體的基本可辨認(rèn)的結(jié)構(gòu)異常。但在LTPA63代所分析的6個核型中卻未見到。
　　H5E97320、85代和LTPA74代均有HPV18E6、E7蛋白表達(dá),但表達(dá)強(qiáng)度有所差異,其中E6、E7蛋白表達(dá)在H5E97385代的最強(qiáng),在H5E97326代相對較弱。上述三代E7蛋白表達(dá)均強(qiáng)于E6蛋白。
　　結(jié)論:1.5E973、LTPA細(xì)胞主要以超二倍體、尤其是亞三倍體為主。H5E973細(xì)胞伴隨代數(shù)增

5、加出現(xiàn)染色體眾數(shù)右移和亞三倍體增多。
　　2.12、14、17和20號染色體數(shù)目增加和Y染色體的丟失在H5E97326、89代和LTPA63代均頻繁出現(xiàn),提示其可能與食管上皮細(xì)胞永生化和惡性轉(zhuǎn)化相關(guān)。
　　3.頻繁出現(xiàn)是H5E97326、89代及LTPA63代的共同特征,可能在食管上皮細(xì)胞永生化和惡性轉(zhuǎn)化中起重要作用。
　　4.der(9),t(9;9)( p24;q11)、der(9),t(9;9)(9qter→ c

6、en→9qter)、der(13),t(13;13)(13qter→cen→13qter)、del(6)(q21)、i(7p)和der(4),t(4;2)(q21;q12)由永生化階段至惡性轉(zhuǎn)化階段呈現(xiàn)進(jìn)行性積累,推測上述異常染色體與食管上皮細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化有關(guān)。
　　5.H5E97320代、85代、LTPA74代均有E6、E7蛋白表達(dá),但表達(dá)強(qiáng)度有所差異。E6、E7蛋白的表達(dá)在H5E97385代最強(qiáng)。上述三代E7蛋白表達(dá)均強(qiáng)于E6