慢病毒介導(dǎo)的siRNA靶向CD47基因?qū)θ撕戆┘?xì)胞Hep-2增殖、凋亡影響的實驗研究.pdf

1、分類號：密級：UDC：學(xué)號：416523511588416523511588南昌大學(xué)醫(yī)學(xué)院碩士研究生學(xué)位論文慢病毒介導(dǎo)的慢病毒介導(dǎo)的siRNAsiRNA靶向靶向CD47CD47基因?qū)θ撕戆┘?xì)基因?qū)θ撕戆┘?xì)胞Hep2Hep2增殖、凋亡增殖、凋亡影響的實驗研究影響的實驗研究Suppressingproliferationinducingapoptosiseffectoflentiviralvectsexpressingsmallinterf

2、eringRNAtargetingCD47geneonHep2cell高樹峰培養(yǎng)單位（院、系）：南昌大學(xué)第二附屬醫(yī)院指導(dǎo)教師姓名、職稱：張少容教授主任醫(yī)師申請學(xué)位的學(xué)科門類：醫(yī)學(xué)學(xué)科專業(yè)名稱：耳鼻咽喉科學(xué)論文答辯日期：2014年05月答辯委員會主席：張劍評閱人：龍平孫建設(shè)2014年06月摘要IIII摘要目的目的探究慢病毒載體介導(dǎo)siRNA抑制CD47基因表達(dá)后對人喉癌Hep2細(xì)胞體外增殖凋亡的影響，為喉癌的基因治療提供有效靶點。方法方法

3、構(gòu)建慢病毒載體，將靶向CD47基因的siRNA慢病毒轉(zhuǎn)染至喉癌細(xì)胞株Hep2；用熒光顯微鏡行Hep2細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化觀察；RTPCR檢測喉癌細(xì)胞CD47mRNA表達(dá)的變化情況；Westernblotting檢測CD47蛋白表達(dá)的變化情況；MTT檢測CD47siRNA基因沉默喉癌Hep2細(xì)胞的生存率；體外吞噬試驗檢測巨噬細(xì)胞對CD47沉默后Hep2細(xì)胞的影響。結(jié)果結(jié)果CD47siRNA慢病毒轉(zhuǎn)染人喉癌細(xì)胞株Hep2后，熒光顯微鏡從形態(tài)學(xué)顯示

4、CD47siRNA能有效抑制喉癌Hep2細(xì)胞增殖，細(xì)胞變形明顯，體積變小，可見細(xì)胞壞死及凋亡；RTPCR和Westernblotting檢測：喉癌Hep2細(xì)胞CD47的mRNA和蛋白表達(dá)水平顯著降低(P0.05)，使CD47mRNA表達(dá)減少76%~82%，CD47蛋白表達(dá)減少77%；慢病毒轉(zhuǎn)染細(xì)胞在48h后MTT檢測細(xì)胞生存率明顯降低(P0.01)；CD47siRNA基因沉默Hep2細(xì)胞更易被巨噬細(xì)胞所吞噬。結(jié)論結(jié)論慢病毒介導(dǎo)的siRN