免疫多糖效果體外評價.pdf

1、本研究以鯽(Carassius auratus)為試驗對象,通過一系列試驗條件如鯽淋巴細(xì)胞最適分離條件、MTT比色法試驗最佳波長和鯽淋巴細(xì)胞最優(yōu)培養(yǎng)條件的探索,建立了鯽淋巴細(xì)胞體外轉(zhuǎn)化試驗體系。在該試驗體系中加入不同濃度的免疫多糖(酵母細(xì)胞壁),根據(jù)免疫多糖(酵母細(xì)胞壁)對轉(zhuǎn)化率影響顯著性水平的高低,能夠快速、準(zhǔn)確、客觀地反映出免疫多糖(酵母細(xì)胞壁)效果的好壞。因此,該試驗體系可以作為體外評價免疫多糖效果的一個新途徑。本研究包括以下內(nèi)容

2、:
　　 通過調(diào)整淋巴細(xì)胞分離液中泛影葡胺(Urografin)的用量,發(fā)現(xiàn)采用比重為1.085的分離液在20℃800 g離心20 min的情況下,可將鯽外周血中的淋巴細(xì)胞有效地分離出來,每毫升外周血可分離到的淋巴細(xì)胞數(shù)量平均為4.88x106個,淋巴細(xì)胞回收率為76.21％～93.79％,平均為85.02％,細(xì)胞存活率大于或等于96％。本試驗成功地建立了鯽外周血淋巴細(xì)胞的分離技術(shù)。
　　 通過對MTT比色法試驗最佳波長

3、的測定,表明鯽淋巴細(xì)胞懸液吸光值在450～700 nm范圍內(nèi)的最大峰值在560 nm,其次為570 nm。本試驗找到了鯽淋轉(zhuǎn)試驗中測定轉(zhuǎn)化率的最佳波長。
　　 對影響鯽淋巴細(xì)胞體外轉(zhuǎn)化的4個主要因素細(xì)胞濃度、植物血球凝集素(PHA-P)濃度、新生牛血清(NCS)添加量和培養(yǎng)時間進(jìn)行正交試驗、方差分析,表明這4個因素對鯽淋巴細(xì)胞體外轉(zhuǎn)化影響均極顯著(P<0.01),對鯽頭腎和血液淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化的影響水平是一致的,最優(yōu)水平組合均為淋巴

4、細(xì)胞濃度為2.5×106個/mL、PHA-P濃度為12.5μg/mL、NCS添加量為25％、培養(yǎng)時間為72 h。說明鯽淋巴細(xì)胞的來源雖然不同,但對促有絲分裂原的反應(yīng)性和轉(zhuǎn)化所需要的條件是一樣的。
　　 在鯽頭腎和血液淋巴細(xì)胞培養(yǎng)液中添加不同濃度的免疫多糖(酵母細(xì)胞壁)72 h后,利用MTT比色法檢測了免疫多糖(酵母細(xì)胞壁)對淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率的影響,結(jié)果表明,70％和90％的免疫多糖(酵母細(xì)胞壁)對鯽頭腎淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率均有明顯的影響

5、,都是在添加量為20μg/mL時轉(zhuǎn)化率最高,其中以90％的免疫多糖(酵母細(xì)胞壁)影響最為顯著；對鯽血液淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率也都有明顯的影響,都是在添加量為40μg/mL時轉(zhuǎn)化率最高,其中以70％的免疫多糖(酵母細(xì)胞壁)影響最為顯著。當(dāng)免疫多糖(酵母細(xì)胞壁)濃度高于或低于上述濃度時,鯽頭腎和血液淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率都有不同程度的下降,但當(dāng)添加量達(dá)到1280μg/mL以上時轉(zhuǎn)化率又有所升高。說明免疫多糖(酵母細(xì)胞壁)作為免疫刺激劑的添加量只有在適量的情