微波制備相對低分子及寡聚透明質(zhì)酸及其生物活性研究.pdf

1、本課題重點研究了LMWHA的微波降解制備工藝、理化性質(zhì)、結(jié)構(gòu)分析及其促血管生成活性。 1.MW-HA的制備工藝研究本文研究了用微波降解制備LMWHA的方法，對方法中主要的降解條件進行了優(yōu)選，確定了微波降解的最佳條件為105℃、pH3。 2.MW-HA的性質(zhì)與結(jié)構(gòu)研究運用紫外光譜(UV)、紅外光譜(IR)、13C-NMR核磁共振波譜分別對微波降解HA(MW-HA)、酸降解HA(CH-HA)和酶降解HA(ED-HA)主要結(jié)構(gòu)

2、與未降解的HA進行了比較。3種不同降解方法得到的LMWHA與HA相比，其譜圖基本一致，說明經(jīng)降解后的HA樣品結(jié)構(gòu)只是由長鏈變?yōu)槎替?，而兩種單糖的組成和結(jié)構(gòu)均未發(fā)生較大變化。 3.MW-HA的促血管生成活性研究探討了MW-HA對人臍靜脈血管內(nèi)皮細胞(ECV304)增殖的影響及其促血管生成作用。采用噻唑藍(MTT)法觀察MW-HA對ECV304的增殖作用；并研究了MW-HA在雞胚絨毛尿囊膜模型(CAM)中的促血管生成作用。證明了MW

3、-HA在150～600μg/mL的濃度范圍內(nèi)可以促進EVC304的增殖。促血管生成實驗研究結(jié)果表明，樣品組和堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)組與蒸餾水空白對照組相比，血管生成數(shù)明顯增加(P<0.05)，隨著LMWHA濃度升高，主血管變得粗壯，血管分支增多，血管密度明顯增大，提示LMWHA有促進CAM血管生成作用且呈劑量依賴性。ED-HA、MW-HA均具有促進CAM血管生成活性，兩者沒有明顯差異，但從新生血管數(shù)目上看，ED-HA的作用較

4、強。MW-HA與CH-HA從新生血管數(shù)目上看，微波降解制備的LMWHA的作用較強。 4 本課題的主要成果： (1)對微波降解制備LMWHA的方法進行了研究，并進行了降解條件優(yōu)化，獲得了制備MW-HA的最佳反應(yīng)條件為105℃、pH3； (2)制備了分子量在10 KDa以下的MW-HA，部分理化指標結(jié)果表明與降解前基本無差異；設(shè)計了一套微波降解的工藝，實驗證明用微波降解制備10 kDa以上的產(chǎn)品，具有快速、結(jié)構(gòu)破壞小

5、等優(yōu)點。 (3)對MW-HA的紫外光譜(UV)、紅外光譜(IR)、13C-NMR核磁共振波譜進行了分析，比較了HA降解前后結(jié)構(gòu)變化情況；并比較了相同分子量MW-HA、ED-HA、CH-HA及未降解HA的譜圖，證實微波降解在降解4h，分子量小于8 kDa時基本無結(jié)構(gòu)破壞，因微波本身加熱均勻、快速等優(yōu)點，微波不失為一種制備LMWHA的好方法。 (4)采用CAM血管生成模型對MW-HA、ED-HA、CH-HA的促血管生成活性進