乙酰膽堿酯酶在人牙周膜細胞中的表達和尼古丁與α-銀環(huán)蛇毒素對其表達的影響.pdf

1、牙周炎以細菌誘發(fā)為始動因子，需在宿主、環(huán)境、遺傳等因素共同作用下導致發(fā)病。大量研究已經證明，吸煙能極大地增加牙周破壞的風險，是牙周炎的危險因素。然而，到目前為止，吸煙對牙周組織的破壞機制、對牙周炎發(fā)生發(fā)展過程的影響仍不明了。尼古丁是煙草的主要成分，有學者推測，尼古丁可能在牙周炎的發(fā)生發(fā)展中起重要作用。
　　非神經乙酰膽堿能系統(tǒng)包含：乙酰膽堿，乙酰膽堿酯酶，膽堿乙?；D移酶，煙堿型乙酰膽堿受體和毒蕈堿型乙酰膽堿受體及乙酰膽堿轉運體。

2、研究認為，尼古丁作為煙草的主要化學物質之一，是非神經乙酰膽堿能系統(tǒng)中煙堿型乙酰膽堿受體的特異性配體。尼古丁與細胞膜上的煙堿型乙酰膽堿受體特異性結合后，經細胞內外信號轉導，產生效應。也就是說，作為煙堿型乙酰膽堿受體特異性配體的尼古丁，可以代替乙酰膽堿，侵入局部非神經乙酰膽堿能系統(tǒng)的網(wǎng)絡，發(fā)揮生物學效應。已有研究報道在人牙齦上皮細胞中存在非神經乙酰膽堿能系統(tǒng)。我們前期研究證實，人牙周膜成纖維細胞（human periodontal liga

3、ment fibroblasts，人PDLF）中存在煙堿型乙酰膽堿受體，且尼古丁可上調該受體表達。然而，人PDLF中是否存在完整的非神經乙酰膽堿能系統(tǒng)，尼古丁是否通過該系統(tǒng)發(fā)揮作用，目前尚不清楚。
　　本實驗所用藥物為尼古丁以及α-銀環(huán)蛇毒素（α-BTX）。其中，α-BTX是煙堿型乙酰膽堿受體α7亞型（α7nAChR）的特異性拮抗劑，能夠特異性結合人體內α7nAChR。
　　本研究采用細胞培養(yǎng)、免疫熒光、蛋白印跡等方法觀察人

4、PDLF中是否存在非神經乙酰膽堿能系統(tǒng)的另一重要成員—乙酰膽堿酯酶，以及尼古丁對該酶的影響，旨在從另一方面探討尼古丁對非神經乙酰膽堿能系統(tǒng)的作用，有助于闡明吸煙相關性牙周炎發(fā)生發(fā)展的作用機制。
　　第一部分：實驗人牙周膜成纖維細胞的體外培養(yǎng)及鑒定
　　1、主要方法：
　　取因正畸治療需要拔除的12-14歲健康人前磨牙，無菌條件下刮取根中1/3牙周膜組織，采用組織塊法進行原代培養(yǎng)，待原代培養(yǎng)成功后，常規(guī)傳代，免疫組化方法

5、進行抗波形絲蛋白、抗角蛋白染色，顯微鏡下觀察。
　　2、主要結果：
　　倒置顯微鏡下觀察細胞形態(tài)和生長情況。細胞鋪滿培養(yǎng)瓶底，密度均勻，呈星形或長梭形，細胞胞漿均勻，細胞質豐滿，細胞核為圓形，細胞排列呈旋渦狀或放射狀。免疫組化結果顯示培養(yǎng)細胞抗波形絲蛋白染色陽性，抗角蛋白染色為陰性。
　　3、主要結論：
　　本實驗所培養(yǎng)細胞為來源于中胚層的人PDLF。
　　第二部分：實驗免疫熒光檢測人牙周膜成纖維細胞中是否