黃芪甲苷對(duì)鎘致TM3細(xì)胞凋亡和縫隙連接蛋白43及通訊功能影響的保護(hù).pdf

1、目的：探討黃芪甲苷對(duì)鎘致TM3細(xì)胞凋亡及縫隙連接蛋白43表達(dá)和縫隙連接細(xì)胞間通訊功能影響的保護(hù)作用。
　　方法：MTT細(xì)胞活性實(shí)驗(yàn)篩選黃芪甲苷拮抗鎘的最佳保護(hù)濃度；流式細(xì)胞術(shù)作TM3細(xì)胞凋亡分析；透射電鏡用作觀察TM3細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)；免疫組織化學(xué)（SP法）、Weastern blot方法檢測(cè)縫隙連接蛋白43表達(dá)；實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)縫隙連接蛋白43 mRNA表達(dá)；劃痕標(biāo)記染料示蹤技術(shù)（SLDT）檢測(cè)縫隙連接細(xì)胞間通訊功能。

2、r>　　結(jié)果：24h、48h MTT實(shí)驗(yàn)：對(duì)照組與不同濃度黃芪甲苷組 TM3細(xì)胞成活率差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；鎘組 TM3細(xì)胞成活率明顯降低，且隨鎘濃度增加降低越明顯；鎘加黃芪甲苷組 TM3細(xì)胞成活率明顯高于相應(yīng)鎘組，黃芪甲苷的最佳保護(hù)濃度為20㎎/L。流式細(xì)胞術(shù)分析：對(duì)照組與黃芪甲苷組24h細(xì)胞凋亡率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；鎘組隨鎘濃度增加凋亡率逐漸增加；鎘加黃芪甲苷組凋亡率均低于相應(yīng)鎘組（P＜0.01）。透射電鏡觀察：鎘處理后 TM3細(xì)胞超微

3、結(jié)構(gòu)破壞明顯；鎘加黃芪甲苷組超微結(jié)構(gòu)破壞較相應(yīng)鎘組為輕。免疫組織化學(xué)（SP法）：與對(duì)照組相比，鎘處理后 TM3細(xì)胞縫隙連接蛋白43陽(yáng)性產(chǎn)物表達(dá)的平均光密度值明顯降低（P＜0.01），平均灰度值明顯升高（P＜0.01）；鎘加黃芪甲苷組縫隙連接蛋白43陽(yáng)性產(chǎn)物平均光密度值表達(dá)雖較對(duì)照組降低，但顯著高于相應(yīng)鎘組（P＜0.01），而平均灰度值表達(dá)雖較對(duì)照組增加，但顯著低于相應(yīng)鎘組（P＜0.01）。Weastern blot、實(shí)時(shí)熒光定量PCR及

4、劃痕標(biāo)記染料示蹤技術(shù)：與對(duì)照組相比，黃芪甲苷組TM3細(xì)胞縫隙連接蛋白43及 mRNA表達(dá)均無(wú)明顯差異，TM3細(xì)胞縫隙連接細(xì)胞間通訊功能無(wú)明顯改變；鎘組TM3細(xì)胞縫隙連接蛋白43和 mRNA表達(dá)均下降（P＜0.01），而TM3細(xì)胞縫隙連接細(xì)胞間通訊功能減弱；鎘加黃芪甲苷組 TM3細(xì)胞縫隙連接蛋白43及 mRNA表達(dá)雖較對(duì)照組降低，但明顯高于鎘組（P＜0.01），縫隙連接細(xì)胞間通訊功能則無(wú)明顯減弱。
　　結(jié)論：黃芪甲苷對(duì)鎘致 TM3細(xì)