鹽酸納美芬注射液在健康人體中的藥代動力學(xué)研究.pdf

1、自阿片受體被提出和發(fā)現(xiàn)其分布后，其藥理學(xué)特征得到充分闡述和重點(diǎn)關(guān)注，尤其是近20余年隨著非離子變性劑 CHAPS的使用以來，μ，κ和σ等經(jīng)典阿片受體得到克隆和純化，其藥理研究取得了許多實(shí)質(zhì)性進(jìn)步并持續(xù)成為生命科學(xué)領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)之一，阿片類藥物的鎮(zhèn)痛、耐受及成癮機(jī)制以及對新型阿片受體拮抗劑的作用的闡釋和應(yīng)用亟待人們進(jìn)一步揭示。 納美芬作為一種具有高選擇性和特異性的純嗎啡受體拮抗劑，化學(xué)名稱為(5α)-17-環(huán)丙基甲基-4，5-環(huán)氧

2、基-6-亞甲基-3，14-二羥基嗎啡喃鹽酸鹽。它能與μ、к、δ各型阿片受體結(jié)合，其中與μ受體結(jié)合作用最強(qiáng)。在國外，其在人體體內(nèi)的藥代動力學(xué)過程已得到闡明。其臨床上，它具有傳統(tǒng)的阿片受體拮抗作用，故可用于抗休克輔助治療：嗎啡類藥物急性中毒的治療以及對戒毒患者復(fù)吸的預(yù)防：酒精中毒的急救、手術(shù)后的麻醉催醒：還可以用于心力衰竭、預(yù)防戒毒患者復(fù)吸、治療脊髓損傷、胃腸功能紊亂；腦保護(hù)；減肥等，是阿片受體拮抗劑納絡(luò)酮和納曲酮的理想替代品。新近的研究顯

3、示其對病理性賭博和搔癢癥具有治療作用，并獲得治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的專利，而且由于其對神經(jīng)內(nèi)分泌的刺激作用，能增加生長激素和催乳素的分泌，減少甲狀腺素和黃體生成素的分泌，可用于治療陽痿、閉經(jīng)等性功能障礙。而且，其特點(diǎn)是作用時(shí)間長，用藥劑量小，安全范圍廣，且對阿片受體無激動作用，不產(chǎn)生依賴性，具有高效低毒的優(yōu)勢。在國內(nèi)，鹽酸納美芬注射液被列為國家第3.1類新藥，經(jīng)國家食品藥品監(jiān)督管理局批準(zhǔn)進(jìn)行臨床研究(臨床研究批件號：2005L01754，靈寶

4、市豫西藥業(yè)有限責(zé)任公司研制)。按照《藥品注冊管理辦法》的有關(guān)規(guī)定，鹽酸納美芬注射液應(yīng)進(jìn)行人體藥代動力學(xué)研究。為研究其在我國健康人體內(nèi)的藥動學(xué)特性，我們參照文獻(xiàn)建立高效液相色譜-質(zhì)譜法(HPLC-MS) 測定血漿中納美芬濃度的方法，分析12名健康受試者靜脈給藥后的血藥濃度，藥動學(xué)各參數(shù)用PKS軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，旨在為臨床用藥提供參考依據(jù)。 目的： 探討鹽酸納美芬注射液在中國健康人體內(nèi)的藥代動力學(xué)行為，為臨床制定合理的給藥方

5、案提供依據(jù)。 方法： 1 血樣采集 1．1 單劑量試驗(yàn)采用隨機(jī)、自身交叉對照試驗(yàn)，將12例受試者隨機(jī)分為A、B兩組，每組6例，男女均等，在Ⅰ、Ⅱ階段分別交叉靜脈注射給藥鹽酸納美芬1mg或2mg，交叉前有1周清洗期。每例受試者均于用藥前在前臂靜脈安置留置針抽血，用藥前采空白血約4ml，再分別于安置留置針給藥后5min，0.25、0.5、1、2、3、4、6、8、10、12、24、36、48h分別采血4mL/次，300

6、0轉(zhuǎn)/min離心5min，取血漿，分雙份于-30℃下冰柜保存，待分析。 2．2 多劑量試驗(yàn)8-12名健康受試者于單劑試驗(yàn)結(jié)束1周后開始進(jìn)行多劑量試驗(yàn)，分別與每日早、晚7：30時(shí)各靜脈推注2mg，連續(xù)用藥6日，于第4、5、6日用藥前和第6日用藥后5min，0.25、0.5、1、2、3、4、6、8、10、12、24、36、48h抽取肘靜脈血5mL/次，3000轉(zhuǎn)/min離心5min，取血漿，分雙份于-30℃下冰柜保存，待分析。

7、 2 生物樣本中的藥物測定采用HPLC-MS血藥濃度檢測方法2．1 色譜條件色譜柱：Agilent Zorbax Eclipse XDB-C<,18>(4.6mm×150mm，5um)； 流動相：0.02mol·L醋酸胺：甲醇 (30∶70，V/V)，流速：0.8mL·min<'-1>； 質(zhì)譜條件：APCI離子源，噴霧N<,2>壓力60psi，干燥N<,2>流速7L·min<'-1>，干燥N<,2>溫度350℃，APC

8、I氣化室溫度400℃，電暈針電流4μA，毛細(xì)管電壓4250V，毛細(xì)管出口電壓120V； 離子化模式：正離子化(positive)； 掃描方式：多重反應(yīng)監(jiān)測(MRM)； 用于定量分析的離子反應(yīng)： m.z 340→322 (納美芬) 和m/z 328→310(納絡(luò)酮)。 2．2 血漿樣品的處理精確吸取血漿1 mL置帶塞10 mL玻璃離心管中，加入內(nèi)標(biāo)溶液(64μg·L<'-1>納絡(luò)酮甲醇溶液)50μL

9、，震蕩混勻，以0.02 mol·L<'-1>氫氧化鈉溶液200μL堿化，加乙酸乙酯-二氯甲烷(4∶1，V/V) 3 mL震蕩30s，3500 r·min<'-1>離心10 min，吸取上清液置5 mL帶塞磨口玻璃離心管中，37℃真空干燥箱中干燥至干，殘留物加入流動相200μL溶解，渦流混合，3000r·min<'-1>離心5 min，取40μL上清液進(jìn)行HPLC/MS分析。 2．3 方法專屬性取6名受試者服藥前空白血漿各1 mL

10、。在“2.1”色譜條件下測得的“1”中來源空白血漿、含藥血漿及受試者給藥后血樣的HPLC-MS色譜圖分別見圖1-A、1-B和1-C。納美芬和納絡(luò)酮的保留時(shí)間分別約為2.5和3.4 min。結(jié)果表明，空白血漿中的內(nèi)源性物質(zhì)不干擾納美芬和納絡(luò)酮的測定。 2．4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備于健康人空白血漿1 mL中分別加入2，5，10，20，50，100，150，200μg·L<'-1>的納美芬甲醇溶液各50μL，震蕩5 s，即得0.1，0.25

11、，0.5，1，2.5，5，7.5，10μg·L<'-1>的納美芬血漿樣品，按照“2.2”方法處理后進(jìn)行HPLC-MS測定。以血漿中納美芬濃度(C)為縱坐標(biāo)，藥物峰面積與內(nèi)標(biāo)峰面積之比(F)為橫坐標(biāo)作圖，用最小二乘法進(jìn)行回歸運(yùn)算，求得的直線回歸方程即為血漿中納美芬標(biāo)準(zhǔn)曲線。 2．5 方法精密度、準(zhǔn)確度和回收率在空白血漿1 mL中分別加入5，100，150μg·L<'-1>的納美芬甲醇溶液50μL，配制成0.25、5、7.5μg·L<'-1

12、>的3個質(zhì)量控制(QC)樣品各5個，連續(xù)測定3天，根據(jù)當(dāng)天的標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算QC樣品的測定濃度，根據(jù)QC樣品結(jié)果計(jì)算本法的準(zhǔn)確度和精密度。 3 指標(biāo)檢測： 主要藥動學(xué)參數(shù)C，T<,max>，T<,1/2>，AUC<,0-48>，AUC<,0-∞>血藥濃度波動系數(shù)，AUCss和Cav；不良反應(yīng)情況。 4 統(tǒng)計(jì)分析 列出受試者靜脈推注鹽酸納美芬注射液后的血漿納美芬濃度和血藥濃度-時(shí)間曲線。將各受試者給

13、藥后各時(shí)間點(diǎn)血漿納美芬的濃度數(shù)據(jù)(均以X±s表示)輸入計(jì)算機(jī)，用上海宏能軟件有限公司編寫的PKS程序?qū)λ?時(shí)數(shù)據(jù)進(jìn)行擬合，求算有關(guān)藥動學(xué)參數(shù)。P<0.05為有顯著性差異。 結(jié)論: 采用高效液相色譜-質(zhì)譜分析法測定納美芬藥物濃度結(jié)果準(zhǔn)確、靈敏度高。該藥健康受試者的藥-時(shí)曲線符合靜脈推注二室模型。該藥的半衰期為12小時(shí)，靜脈推注后5min藥物濃度達(dá)最高峰，12名健康受試者單劑量靜脈推注1mg或2mg C<,max>分別為(4