DR4基因啟動(dòng)子甲基化對(duì)TRAIL誘導(dǎo)肺鱗癌細(xì)胞凋亡作用的影響.pdf

1、背景及目的:
　　聯(lián)合放化療目前是治療肺鱗癌患者的主要臨床治療模式，但有效率出現(xiàn)瓶頸現(xiàn)象，因此尋找新的、高效的、毒副反應(yīng)小的抗腫瘤藥物成為腫瘤基礎(chǔ)和臨床研究的熱點(diǎn)。TRAIL是一種新型生物制劑，其可以誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，對(duì)正常組織無(wú)明顯損傷。但是多數(shù)腫瘤對(duì)其耐藥，其原因機(jī)制有很多，有研究報(bào)道可能與其細(xì)胞表面死亡受體4(DR4)基因啟動(dòng)子甲基化有關(guān)，逆轉(zhuǎn)基因甲基化可能提高TRAIL誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡作用。因此本文以肺鱗癌為研究對(duì)象，探討

2、DR4基因啟動(dòng)子甲基化與DR4表達(dá)的關(guān)系，進(jìn)一步研究DR4基因啟動(dòng)子甲基化狀態(tài)是否會(huì)影響TRAIL對(duì)肺鱗癌細(xì)胞的誘導(dǎo)凋亡作用，為肺鱗癌的治療提供新的治療策略。
　　方法:
　　1、采用Elivision二步法檢測(cè)臨床組織DR4的表達(dá)情況;
　　2、采用甲基化特異性PCR(MSP)檢測(cè)臨床組織DR4的甲基化狀態(tài);
　　3、采用MSP法檢測(cè)5-氮雜-2'-脫氧胞苷(5-Aza-CdR)處理肺鱗癌細(xì)胞株(H226、SK

3、-MES-1、H520)前后DR4基因啟動(dòng)子甲基化狀態(tài);
　　4、采用RT-PCR和Western blot法檢測(cè)5-氮雜-2'-脫氧胞苷(5-Aza-CdR)處理肺鱗癌細(xì)胞株(H226、SK-MES-1、H520)前后DR4基因mRNA及蛋白表達(dá)情況;
　　5、采用MTT法檢測(cè)肺鱗癌細(xì)胞增殖抑制率;
　　6、采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)肺鱗癌細(xì)胞凋亡率。
　　結(jié)果:
　　1、臨床研究結(jié)果如下，甲基化特異性PCR(M

4、SP)結(jié)果顯示，在36例肺鱗癌患者中DR4基因啟動(dòng)子有80.6％處于甲基化狀態(tài)，甲基化狀態(tài)與肺鱗癌患者的年齡、性別、吸煙、病理分化程度、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等臨床病理特征無(wú)相關(guān)性（P＞0.05）。免疫組化結(jié)果表明，36例肺鱗癌患者中DR4低表達(dá)概率約為58.3％（36例中有21例），有4例為未表達(dá)，17例為低表達(dá)，10例為中高度表達(dá)，5例為高表達(dá)。同時(shí)研究還證實(shí)肺鱗癌DR4的表達(dá)水平與其基因啟動(dòng)子甲基化程度有關(guān)(P＜0.05)。

5、>　　2、體外實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果如下，MSP表明H226、SK-MES-1細(xì)胞DR4基因呈甲基化狀態(tài)，其mRNA及蛋白均低表達(dá)，H520呈非甲基化狀態(tài)，其mRNA及蛋白高表達(dá);5-Aza-CdR干預(yù)后H226、SK-MES-1細(xì)胞DR4基因呈非甲基化狀態(tài)，其mRNA及蛋白表達(dá)較前均顯著上調(diào)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），H520仍呈非甲基化狀態(tài)，其mRNA及蛋白表達(dá)量較前無(wú)明顯差異。同時(shí)研究還證實(shí)TRAIL對(duì)H226、SK-MES-1細(xì)胞