豬苓多糖對(duì)小鼠骨髓來(lái)源樹(shù)突狀細(xì)胞的影響及其抗H22肝腫瘤效應(yīng).pdf

1、豬苓多糖(Polyporus polysaccharides,PPS)是中藥多孔菌科真菌豬苓中提取的物質(zhì),已有研究表明,其能提高機(jī)體免疫力,具有抗腫瘤作用。樹(shù)突狀細(xì)胞(Dendritic cell,DC)是目前已知功能最強(qiáng)大的專職抗原提呈細(xì)胞(Antigen presenting cell,APC),參與抗原的攝取、加工與提呈,是機(jī)體初次免疫應(yīng)答的始動(dòng)者,在機(jī)體抗腫瘤免疫調(diào)節(jié)中起重要作用。其膜表面高表達(dá)MHC分子及多種共刺激分子和黏附分

2、子,有效激活初始T細(xì)胞;它能有效呈遞抗原到MHCⅠ和Ⅱ分子上,在相同微環(huán)境中使輔助性T細(xì)胞或殺傷性T細(xì)胞成簇,有助于細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞反應(yīng)(Cytotoxic T Lymphocyte,CTL)。以往有研究表明腫瘤患者機(jī)體中DC功能低下;腫瘤微環(huán)境中浸潤(rùn)性樹(shù)突狀細(xì)胞數(shù)量與腫瘤患者預(yù)后成正相關(guān),瘤組織中DC浸潤(rùn)多則預(yù)后好。研究中藥抗腫瘤免疫學(xué)機(jī)制是否參與影響機(jī)體DC細(xì)胞增殖、成熟、表型及功能改變,為近年來(lái)中藥抗腫瘤免疫學(xué)探索提供了新的思路

3、。
　　目的：本實(shí)驗(yàn)通過(guò)觀察豬苓多糖對(duì)荷H22肝癌小鼠骨髓來(lái)源DC的增殖、分化發(fā)育、表面標(biāo)志、抗原提呈功能的影響及對(duì)荷瘤小鼠的免疫作用,探討豬苓多糖的抗腫瘤效應(yīng),為進(jìn)一步闡明豬苓多糖的免疫學(xué)活性提供依據(jù)。
　　實(shí)驗(yàn)方法：1.制備荷H22肝癌小鼠。2.體外干預(yù)對(duì)DC的影響:昆明小鼠右腋下荷瘤,喂養(yǎng)10d后拉頸處死,無(wú)菌取骨髓細(xì)胞,應(yīng)用rmGM-CSF和rmIL-4體外誘導(dǎo)骨髓細(xì)胞生成DC,同時(shí)培養(yǎng)液中加入不同濃度豬苓多糖(1μ

4、g/ml,5μg/ml,10μg/ml)使其與DC共培養(yǎng),并設(shè)生理鹽水(normal saline,NS)對(duì)照組,于第5d加凍融抗原沖擊,培養(yǎng)至第8 d收集各組DC。通過(guò)倒置顯微鏡觀察DC的形態(tài)變化;應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)技術(shù)檢測(cè)其表面標(biāo)志CD11a、CD86表達(dá)情況;用MTT法檢測(cè)DC激活的T細(xì)胞對(duì)H22肝癌細(xì)胞的殺傷效應(yīng)。按上述方法無(wú)菌取荷瘤小鼠骨髓細(xì)胞,應(yīng)用rmGM-CSF和rmIL-4體外誘導(dǎo)骨髓細(xì)胞生成DC,同時(shí)培養(yǎng)液中加入不同濃

5、度豬苓多糖(1μg/ml,5μg/ml,10gg/ml)使其與DC共培養(yǎng),設(shè)生理鹽水對(duì)照組,第5d不加凍融抗原,培養(yǎng)8d檢測(cè)DC增殖周期。3.豬苓多糖體內(nèi)干預(yù)對(duì)荷瘤小鼠的影響:昆明小鼠右腋下荷瘤,24h后應(yīng)用不同濃度的豬苓多糖(20μg、200μg、2000μg)左下腹腔注射,并設(shè)生理鹽水對(duì)照組,連續(xù)注藥10d后于第11d拉頸處死各組小鼠,分別計(jì)算其脾指數(shù)和胸腺指數(shù),觀察豬苓多糖對(duì)免疫功能的影響;通過(guò)測(cè)定腫瘤抑制率觀察其抗腫瘤效應(yīng)。采用

6、統(tǒng)計(jì)軟件包SPSS10.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,結(jié)果用(?)±s表示,多個(gè)樣本均數(shù)之間采用單因素方差分析(One-way analysis of variance,One-way ANOVA),顯著性水準(zhǔn)為p<0.05。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果：1.本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用荷瘤小鼠骨髓來(lái)源的DC,體外培養(yǎng)加入豬苓多糖。經(jīng)凍融抗原沖擊后,DC表面分子CD86、CD11a表達(dá)增高(加藥組與生理鹽水對(duì)照組相比,差異有顯著性,p<0.05);DC誘導(dǎo)的CTL對(duì)H22肝

7、癌細(xì)胞殺傷活性增加(加藥組與生理鹽水對(duì)照組相比,差異有顯著性,p<0.05)。未經(jīng)凍融抗原沖擊的DC其增殖周期有所增高(加藥組與生理鹽水對(duì)照組相比,差異有顯著性,p<0.05)。2.豬苓多糖組體內(nèi)干預(yù)能夠增加荷H22肝癌小鼠脾指數(shù),與生理鹽水對(duì)照組相比,p<0.05;而其增加荷H22肝癌小鼠胸腺指數(shù)效果不明顯,與生理鹽水對(duì)照組比較,p>0.05。此外,豬苓多糖組能夠提高荷H22肝癌小鼠抑瘤率,抑制腫瘤的生長(zhǎng),與生理鹽水對(duì)照組相比差異有統(tǒng)