乳源免疫調(diào)節(jié)肽對酒精誘導(dǎo)性肝細(xì)胞損傷干預(yù)機(jī)制.pdf

1、目的:
　　1.觀察長期酒精刺激能否在體外誘導(dǎo)正常肝細(xì)胞株(LO2)產(chǎn)生脂肪變性、線粒體受損、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激（ESR）等病理變化。
　　2.探索乳源免疫調(diào)節(jié)肽（PGPIPN）是否具有延緩酒精刺激肝細(xì)胞損傷的作用，并探索其可能的分子機(jī)制。
　　方法
　　1.構(gòu)建能穩(wěn)定遺傳的酒精刺激肝細(xì)胞損傷模型，MTT法篩選酒精和PGPIPN最佳用藥范圍，同時(shí)向正常LO2細(xì)胞加入酒精和不同濃度PGPIPN連續(xù)培養(yǎng)三個(gè)月。
　　2

2、.用油紅O染色觀察LO2脂肪變性程度。透射電鏡對比各實(shí)驗(yàn)組線粒體、核仁等結(jié)構(gòu)。
　　3.RT-PCR檢測脂肪合成基因（ACC）、線粒體受損相關(guān)基因（Cyt-C、Caspase-3）、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)基因（GRP78和CHOP）的表達(dá)。
　　4.Western Blotting檢測脂肪合成相關(guān)蛋白（ACC）、線粒體受損相關(guān)蛋白（Cyt C、Caspase-3）、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白（GRP78、CHOP）的表達(dá)。
　　結(jié)果<

3、br>　　1.MTT篩選0.5％為酒精造模濃度，1×10-4g/L、1×10-3g/L、1×10-2g/L為PGPIPN最佳用藥濃度，并用以上濃度造模成功。
　　2.與正常肝細(xì)胞LO2相比，酒精用藥組油紅O染色出現(xiàn)明顯脂肪變性，甚至出現(xiàn)脂肪粒融合現(xiàn)象，電鏡則顯示線粒體嚴(yán)重膨脹變性，而PGPIPN用藥組可以緩解脂肪變性，線粒體膨脹變性。
　　3.RT-PCR顯示 PGPIPN組與酒精組比較：ACC、Cyt-C、Caspase-