乳源免疫調(diào)節(jié)肽體外抑制人卵巢癌細胞侵襲和轉(zhuǎn)移.pdf

1、目的：探討乳源免疫調(diào)節(jié)肽(PGPIPN)對人卵巢癌細胞侵襲和轉(zhuǎn)移的影響,探討PGPIPN抑制卵巢癌細胞侵襲和轉(zhuǎn)移的可能分子機制。
　　方法：Transwell小室測定其侵襲力和遷移力,細胞劃痕實驗測定細胞運動能力,細胞克隆形成實驗觀察細胞的克隆形成能力,MTT法比較PGPIPN對細胞株SKOV3、人正常肝細胞株LO2、小鼠永生化成纖維細胞株(MEFS)、原代卵巢癌細胞、原代乳腺癌細胞和原代卵巢癌旁組織細胞的生長抑制情況,檢測PGP

2、IPN的細胞毒性,PCR和westernblot檢測MTA1與NM23H1基因的mRNA和蛋白質(zhì)的表達情況。
　　結(jié)果：Transwell試驗中,與空白對照組相比,濃度為1μg·ml-1和10μg·ml-1的PGPIPN明顯抑制了卵巢癌細胞的侵襲和轉(zhuǎn)移(p<0.01),抑制率細胞株SKOV3分別為20.20％和23.78%,原代卵巢癌細胞為23.56%和27.11%;劃痕實驗顯示對細胞株的運動能力得到了明顯的抑制(p<0.01),

3、PGPIPN濃度為10μg·ml-1時,細胞株SKOV3的24h抑制率為56.24%;平板法的克隆形成實驗結(jié)果較明顯,與空白對照組相比1μg·ml-1和10μg·ml-1的PGPIPN抑制率分別為32.50%和38.11%;MTT實驗中,PGPIPN濃度為10μg·ml-1時,細胞株SKOV3的72h抑制率為32.36%,而LO2和MEFS的抑制率較低,均無統(tǒng)計學(xué)意義(p>0.05),與此同時,順鉑對其三種細胞均有較強的抑制作用(p<0

4、.01)。PCR實驗中顯示,PGPIPN可以顯著降低細胞株SKOV3的MTA1基因的表達(p<0.01),當(dāng)濃度為10μg·ml-1時,MTA1基因的mRNA降低率最大,為23.11%,同樣,在卵巢癌原代細胞中有相似的結(jié)果,濃度為10μg·ml-1時的降低率為25.72%;PGPIPN可以顯著增強細胞株SKOV3的NM23H1基因的表達(p<0.01),當(dāng)濃度為10μg·ml-1時,NM23H1基因的mRNA增長率最大,為24.89%,

5、同樣,在卵巢癌原代細胞中有相似的結(jié)果,濃度為10μg·ml-1時的增長率為25.91%。westernblot試驗中顯示,PGPIPN可以顯著降低MTA1蛋白的表達(p<0.01),當(dāng)濃度為10μg·ml-1時,降低率最大,細胞株SKOV3為22.39%,原代細胞為24.08%。
　　結(jié)論:1、PGPIPN能夠抑制人卵巢癌細胞的侵襲和轉(zhuǎn)移,對正常細胞無細胞毒性作用;2、PGPIPN通過下調(diào)MTA1與上調(diào)NM23H1基因的mRNA和