黃芪甲苷對慢性心力衰竭大鼠心肌CTGF、TGFβ1表達的影響.pdf

1、目的：采用腹主動脈縮窄術(shù)建立慢性心力衰竭大鼠模型，觀察黃芪甲苷對大鼠心肌組織中CTGF、TGFβ1表達的影響，初步研究黃芪甲苷對大鼠心肌纖維化的抑制作用以及改善心臟功能的作用是否通過抑制CTGF、TGFβ1的表達來發(fā)揮作用。
　　方法：采購SD成年雄性大鼠120只，體重280g-320g，清潔級別，其中110只行腹主動脈縮窄術(shù)操作，其余假手術(shù)組（10只）除不結(jié)扎外其他操作同腹主動脈縮窄術(shù)操作，腹主動脈縮窄術(shù)術(shù)后大鼠存活60只，隨機

2、分為假手術(shù)組、模型組、黃芪甲苷低劑量組(20 mg· kg-1·d-1)、黃芪甲苷中劑量(40 mg·kg-1·d-1)及黃芪甲苷高劑量(60 mg·kg-1·d-1)組、纈沙坦組(10mg·kg-1·d-1)，每組均為12只，假手術(shù)組全部存活。術(shù)后8周行心臟超聲和血流動力學(xué)相關(guān)指標的檢測提示慢心力衰竭模型建立后，給予相應(yīng)劑量的黃芪甲苷（黃芪甲苷組）、纈沙坦（纈沙坦組）、生理鹽水（假手術(shù)組、模型組），每日一次，總計持續(xù)4周。4周后行再次

3、完善心臟超聲以及血流動力學(xué)相關(guān)指標的檢測，取除心臟，游離左心室心肌，計算HW/BW、LVW/BW。心肌組織用于HE染色、Masson染色。光鏡下觀察心肌組織的形態(tài)學(xué)的變化以及心肌纖維化程度，并采用圖像處理系統(tǒng)計算各組大鼠心肌纖維化膠原容量比值(CVF)。采用RT-PCR方法進行監(jiān)測各組大鼠心肌組織中CTGFmRNA、TGFβ1mRNA的表達水平的變化。采用免疫組織化學(xué)法檢測心肌組織中結(jié)締組織生長因子(CTGF)、結(jié)締組織轉(zhuǎn)化生長因子(T

4、GFβ1)的表達，并采用相關(guān)的圖像處理系統(tǒng)進行定量分析。采用Western-bloting再次檢測心肌組織中CTGF、TGFβ1的表達，并應(yīng)用全能型ChemiDocMP成像分析系統(tǒng)處理圖像，用積分吸光度比值作為CTGF、TGFβ1的相對表達量。所有的計量資料數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標準差來表示，采用SPSS17.0統(tǒng)計學(xué)軟件進行單因素方差分析（Oneway ANOVA）。P＜0.05表示為有統(tǒng)計學(xué)差異，P＜0.01表示為有顯著統(tǒng)計學(xué)差異。

5、　　結(jié)果：(1)模型組大鼠精神萎靡、行動遲緩、活動后憋喘明顯、雙下肢水腫，其余各組癥狀、體征不明顯。(2)同假手術(shù)組相比，模型組大鼠血流動力學(xué)以及心臟超聲相關(guān)指標變化明顯，左室舒張末期壓力(LVEDP)、左室收縮壓(LVSP)、舒張末期室間隔厚度(IVSd)、左室后壁厚度(LVPWd)顯著上升(P＜0.01)。左室內(nèi)壓最大上升速率(+dp/dtmax)、左室內(nèi)壓最大下降速率（-dp/dtmax）、左室舒張末期內(nèi)徑(LVEDd)下降明顯(

6、P＜0.01)，同模型組相比，黃芪甲苷各組LVEDP、LVSP、IVSd、LVPWd下降明顯（P＜0.05或P＜0.01）。+dp/dtmax、-dp/dtmax、LVEDd上升明顯（P＜0.05或P＜0.01）。(3) HE染色以及Masson染色中，假手術(shù)組大鼠心肌細胞排列整齊、邊界清晰、細胞大小一致，細胞明顯水腫以及肥大表現(xiàn)，細胞間質(zhì)無明顯纖維組織。模型組大鼠細胞排列紊亂，大小不一，細胞肥大明顯。黃芪甲苷各組較模型組改善明顯，表現(xiàn)

7、出明顯的劑量依賴性，CVF較模型組明顯下降（P＜0.05或P＜0.01）。(4) RT-PCR中，同假手術(shù)組相比，模型組CTGFmRNA、TGFβ1mRNA表達水平明顯上升(P＜0.01)。同模型組相比，黃芪甲苷各組CTGFmRNA、TGFβ1mRNA表達水平不同程度下降(P＜0.01或P＜0.01)。(5)在免疫組化以及蛋白免疫印跡實驗中，同假手術(shù)組相比，模型組大鼠心肌組織中CTGF、TGFβ1表達水平上升顯著(P＜0.01)。與模型

8、組相比，黃芪甲苷各組以及纈沙坦組大鼠心肌組織中CTGF、TGFβ1表達水平下降(P＜0.01或P＜0.05)。
　　結(jié)論：(1)采用腹主動脈縮窄術(shù)可于術(shù)后8周形成慢性心力衰竭大鼠模型，主要是機制增加心臟的后負荷實現(xiàn)的。(2)黃芪甲苷具有改善心功能、抑制心肌纖維化的作用，具體的作用機制可能與黃芪甲苷抑制CTGF、TGF-β1兩種生長因子的表達有關(guān)。(3)黃芪甲苷具有抑制慢性心衰大鼠模型心肌組織中CTGF、TFGβ1的的表達，并呈現(xiàn)劑