丹參酮ⅡA在大鼠肺臟的藥代動力學(xué)研究.pdf

1、丹參酮ⅡA是中藥丹參的主要活性成分之一，具有多種藥理作用。之前的研究表明，丹參酮ⅡA靜脈給藥后在大鼠體內(nèi)組織分布廣泛，特別是在肺臟長期儲留，可達12天。丹參酮ⅡA在肺部大量儲留可能與其藥效學(xué)有密切聯(lián)系，但丹參酮ⅡA在肺臟儲留的藥代動力學(xué)機制并不清楚。本研究將在整體動物水平研究丹參酮ⅡA在大鼠肺臟的首過效應(yīng)，然后在亞細胞水平研究丹參酮ⅡA在肺組織的細胞器分布，以解釋在肺內(nèi)儲留的藥代動力學(xué)機制。研究結(jié)果有助于了解丹參酮ⅡA的藥代動力學(xué)特征，

2、為下一步更好地開發(fā)和利用丹參酮ⅡA提供科學(xué)依據(jù)。
　　 一、生物樣品中丹參酮ⅡA檢測的LC-MS/MS分析方法的驗證。
　　 建立并確證測定生物樣品中丹參酮ⅡA濃度的靈敏、特異、可靠、線性范圍廣的LC-MS/MS分析方法。生物樣品采用乙酸乙酯液-液萃取法進行抽提，內(nèi)標(biāo)為氯雷他定(Loratadine)。采用實驗室已經(jīng)建立的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜的方法檢測。每個樣品的分析時間為2.5min。分析方法的定量下限為1.0ng/mL

3、，各生物樣品中丹參酮ⅡA的線性相關(guān)程度良好(r2均大于0.99)。以質(zhì)控樣品計算該分析方法的批內(nèi)精密度RSD在0.60％～12.79％范圍內(nèi)，批間精密度RSD在1.05％～13.24％范圍內(nèi)；方法的準(zhǔn)確度在85.46％～114.50％之間；方法的提取回收率在45.58％～57.48％之間。各項穩(wěn)定性考察符合SFDA對生物樣品測定方法的要求。該分析方法經(jīng)驗證結(jié)果滿意，樣品處理及檢測過程簡單、快速，可滿足丹參酮ⅡA肺臟藥代動力學(xué)研究的要求。

4、
　　 二、丹參酮ⅡA在大鼠體內(nèi)的肺首過效應(yīng)研究。
　　 通過比較頸靜脈注射與頸動脈注射兩種給藥途徑下大鼠血漿中原型丹參酮ⅡA與結(jié)合型丹參酮ⅡA的各藥動學(xué)參數(shù)，來考察丹參酮ⅡA在大鼠體內(nèi)的肺首過效應(yīng)。12只雄性SD大鼠分成兩組(一只死亡，數(shù)據(jù)缺失)，分別經(jīng)左頸動脈、右頸靜脈給予丹參酮ⅡA6mg/kg。兩組于給藥前(0h)與給藥后3、5、7、10、15、30、45min及1、1.5、2、3、4、6、8、12h從左頸動脈取血

5、。采用高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(LC-MS/MS)方法測定血漿中丹參酮ⅡA的濃度，用非房室模型計算其藥代動力學(xué)參數(shù)。結(jié)果顯示，頸靜脈給藥組與頸動脈給藥組大鼠的原型丹參酮ⅡA的AUC0→t存在統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.05)，分別為(241.27±46.90)ng·h/L及(371.73±66.78)ng·h/L，AUC0→∞也存在統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.05)。體內(nèi)清除率CL在頸靜脈及頸動脈給藥組分別為(23.68±4.32)和(15.53±2.8

6、0)L/h/kg，組間有顯著差異(P＜0.05)。頸動脈給藥組的葡萄糖醛酸結(jié)合型丹參酮ⅡA的AUC0→∞為(1131.01±382.54)ng·h/L，稍大于頸靜脈給藥組的(1012.56±247.40)ng·h/L，P值大于0.05。大鼠肺臟對丹參酮ⅡA的首過清除率為35.59mL/min，遠大于大鼠肝臟的血流量。肺臟對丹參酮ⅡA的固有清除率為肺血流量Q的53.85％，為45.71mL/min。丹參酮ⅡA在大鼠體內(nèi)的肺首過效應(yīng)為0.3

7、5。
　　 三、丹參酮ⅡA在大鼠肝臟、肺臟內(nèi)細胞器的分布。
　　 考察給大鼠靜脈注射丹參酮ⅡA后，丹參酮ⅡA在大鼠肺組織內(nèi)細胞器的分布，并與其在肝臟中的細胞器分布比較，以解釋丹參酮在肺臟內(nèi)分布的藥代動力學(xué)機制。大鼠經(jīng)頸靜脈給予丹參酮ⅡA6mg/kg，于給藥后0.5、3、6、9、12、24、36、48h后分批處死，取其肝、肺組織，制成組織勻漿，采用差速離心法分離細胞器。采用高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(LC-MS/MS)方法測定

8、組織和細胞器中丹參酮ⅡA的濃度。大鼠右頸靜脈注射6mg/kg丹參酮ⅡA0.5h后，肺臟的原型丹參酮ⅡA濃度為(5454.71±1750.50)ng/g，遠遠高于肝臟中的(361.52±112.21)ng/g，約為肝臟中的15倍。給藥后大多數(shù)時間點，不論是原型還是結(jié)合型，丹參酮ⅡA在肺臟的蓄積濃度遠高于在肝臟的濃度。丹參酮ⅡA經(jīng)頸靜脈給藥后，在肝臟和肝臟的各細胞器中，主要以結(jié)合型的形式存在，原型藥物量較少。而在肺臟中則不同，原型丹參酮ⅡA

9、比結(jié)合型稍多，但是濃度相差不大。丹參酮ⅡA在大鼠肝臟的微粒體和溶酶體部分分布較多，但是未發(fā)現(xiàn)明顯的蓄積部位。而在肺臟的五種細胞器中，不論是原型還是結(jié)合型，各時間點丹參酮ⅡA在第3部分的相對蓄積率明顯高于其他四部分，約為其他組的2～3倍。而且有多個時間點的原型和結(jié)合型丹參酮ⅡA的相對蓄積率在第3部分和其他細胞器的有統(tǒng)計學(xué)差異。表明丹參酮ⅡA在大鼠肺臟主要蓄積于輕線粒體部分。這可能與丹參酮的高脂溶性有關(guān)，也提示丹參酮ⅡA在大鼠肺臟的線粒體可