三叉神經(jīng)電刺激預(yù)處理對大鼠急性癲癇發(fā)作的影響及其機制的初步探索.pdf

1、目的：
　　1.通過行為學(xué)改變觀察經(jīng)皮三叉神經(jīng)電刺激(TCTNS)預(yù)處理后對戊四氮(PTZ)誘導(dǎo)的大鼠急性癲癇發(fā)作的影響。
　　2.通過檢測TCTNS預(yù)處理后對海馬部位谷氨酸脫羧酶(GAD)表達(dá)的影響,探討三叉神經(jīng)電刺激抗癲癇可能的機制。
　　3.通過檢測TCTNS對大鼠孤束核、藍(lán)斑核、丘腦、大腦皮層和海馬等結(jié)構(gòu)神經(jīng)元內(nèi)Fos蛋白表達(dá)(反應(yīng)神經(jīng)元的興奮性)的影響,探討三叉神經(jīng)電刺激興奮傳導(dǎo)的可能機制。
　　資料和

2、方法：
　　1.選用成年健康雄性SD大鼠48只,分對照組(假刺激組)和實驗組(電刺激組),分別給予連續(xù)1d、7d、14d、28d的假刺激和三叉神經(jīng)電刺激預(yù)處理后腹腔注射PTZ,觀察給藥后2h內(nèi)大鼠急性癲癇發(fā)作行為學(xué)表現(xiàn),行為學(xué)觀察2h后立即水合氯醛麻醉處死,多聚甲醛灌注固定等,并應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法檢測大鼠海馬各區(qū)GAD65和GAD67的表達(dá)。實驗組間比較采用配對t檢驗,實驗組內(nèi)比較采用雙因素方差分析;P<0.05定義為差異有統(tǒng)計

3、學(xué)意義。
　　2.選用成年健康雄性SD大鼠42只,分對照組(假刺激組)、三叉神經(jīng)電刺激后存活0h、1h、2h、3h、4h、6h后取腦共7組。刺激組刺激參數(shù):頻率140Hz、電流10mA、脈寬0.5ms、正相脈沖刺激30s間歇5min,連續(xù)刺激2h。對照組刺激參數(shù)均設(shè)置為0。應(yīng)用免疫組化方法檢測電刺激對正常大鼠孤束核、藍(lán)斑、丘腦、大腦皮層和海馬等結(jié)構(gòu)神經(jīng)元內(nèi)fos蛋白表達(dá)和分布,探討三叉神經(jīng)電刺激對正常大鼠腦同步化影響的可能機制。組

4、間比較采用配對t檢驗,P<0.05定義為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　1在三叉神經(jīng)預(yù)刺激實驗中:
　　1.1兩組大鼠預(yù)刺激后急性發(fā)作行為學(xué)改變:刺激1d、7d實驗組與其相應(yīng)假刺激組比較大鼠發(fā)作程度上無明顯差異(P﹥0.05)。而連續(xù)刺激14d、28d刺激組大鼠癲癇發(fā)作程度上較其相應(yīng)對照組明顯減輕,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P﹤0.05),癲癇發(fā)作級別較低,持續(xù)時間短,無死亡;假刺激組發(fā)作程度均較重,持續(xù)時間長,分值均較高

5、。在實驗中,1d實驗組和28d假刺激組大鼠分別死亡2只,7d假刺激組死亡1只。
　　1.2海馬各部位均有GAD65陽性細(xì)胞表達(dá),但以CA3區(qū)和背側(cè)齒狀回表達(dá)最密集,主要在胞漿中表達(dá)。與相應(yīng)假刺激組比較,刺激1d組大鼠海馬區(qū)GAD65陽性表達(dá)增加不明顯(P﹥0.05),刺激組7d、14d、28d大鼠海馬區(qū)GAD65表達(dá)數(shù)目明顯增加(P﹤0.05),著色增強,并且隨刺激時間延長,GAD65陽性表達(dá)增加越明顯,各時間段實驗組間比較均有差

6、異(P﹤0.05)。
　　1.3GAD67在海馬CA2、CA3及DG區(qū)表達(dá)較密集,也主要在胞漿中表達(dá),與相應(yīng)假刺激組比較,電刺激各組GAD67陽性細(xì)胞光密度比較,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P﹤0.05),但表達(dá)增加與刺激時間長短無明顯關(guān)系。
　　2在三叉神經(jīng)刺激正常大鼠后檢測腦內(nèi)c-Fos蛋白表達(dá)的實驗中:和假刺激組相比,電刺激各組c-Fos表達(dá)明顯增加。在接受電刺激后存活0h組內(nèi)即可觀察到c-Fos蛋白表達(dá),1小時后表達(dá)明顯增加

7、,2-3小時達(dá)到高峰,4小時開始下降,6小時基本完全消失。表達(dá)呈彌漫性,但以皮層、海馬、丘腦、下丘腦、孤束核和藍(lán)斑核最明顯,不同部位的變化趨勢一致。
　　結(jié)論：
　　1.經(jīng)皮三叉神經(jīng)電刺激預(yù)處理可以減輕PTZ誘導(dǎo)的大鼠急性癲癇發(fā)作,這可能與海馬區(qū)內(nèi)GAD65和GAD67陽性表達(dá)增多,進(jìn)而誘導(dǎo)腦內(nèi)抑制性機制的增強有關(guān)。
　　2.經(jīng)皮三叉神經(jīng)電刺激可以激活正常大鼠孤束核、藍(lán)斑、丘腦、下丘腦、海馬、大腦皮層等部位,本研究為進(jìn)