豬前脂肪細(xì)胞的分離培養(yǎng)與鑒定及豬SMAF1，ATGL基因的組織表達(dá)規(guī)律.pdf

1、華中農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文豬前脂肪細(xì)胞的分離培養(yǎng)與鑒定及豬SMAF1，ATGL基因的組織表達(dá)規(guī)律姓名：楊紅文申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：動(dòng)物遺傳育種與繁殖指導(dǎo)教師：蔣思文20060601豬前脂肪細(xì)胞的分離培養(yǎng)與鑒定及豬SMAFlATGL基因的組織表達(dá)規(guī)律摘要分離、培養(yǎng)及鑒定豬前脂肪細(xì)胞，以及研究在豬脂肪細(xì)胞發(fā)生(adipogenesis)和脂肪細(xì)胞功能中可能起重要作用的基因的組織表達(dá)規(guī)律具有重要的理論和實(shí)踐意義。本研究以長(zhǎng)大雜交豬為試驗(yàn)材料，

2、建立分離、培養(yǎng)和鑒定豬前脂肪細(xì)胞的方法；采用候選基因法選擇在脂肪細(xì)胞發(fā)生和脂肪細(xì)胞功能中起重要生理作用的小脂肪細(xì)胞因子l(smalladipocytefactor1，SMAF／)和脂肪甘油酸脂酶(adiposetriglyceridelipase，ATGL)基因，以大自豬為試驗(yàn)材料，應(yīng)用比較基因組學(xué)、生物信息學(xué)等方法分離克隆豬SMAFl基因；應(yīng)用半定量RTPCR方法，分析豬SMAFl和ATGL基因的組織表達(dá)譜，同時(shí)以4月齡梅山豬和大白豬

3、為試驗(yàn)材料，研究豬SMAFl和ATGL基因在脂肪型豬和瘦肉型豬皮下脂肪組織中的表達(dá)差異。通過(guò)研究獲得如下結(jié)果：1豬前脂肪細(xì)胞的分離、培養(yǎng)及鑒定11采用酶消化法從新生小豬背部皮下脂肪組織中分離豬前脂肪細(xì)胞，建立了豬前脂肪細(xì)胞的分離、培養(yǎng)和鑒定方法。通過(guò)體外培養(yǎng)、誘導(dǎo)分化，細(xì)胞由剛接種時(shí)的紡錘形逐漸變圓，慢慢聚集脂滴，聚集脂滴的細(xì)胞數(shù)量逐漸增加，體積增大，培養(yǎng)至7天后，有少部分細(xì)胞從瓶底漂浮起來(lái)，慢慢死亡?！?2根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)曲線觀察細(xì)胞的基

4、本生物學(xué)特性，豬前脂肪細(xì)胞接種后，第1～2天生長(zhǎng)緩慢，第3天生長(zhǎng)開始加快，進(jìn)入指數(shù)生長(zhǎng)期，持續(xù)3天左右后進(jìn)入平臺(tái)期，第7天，細(xì)胞數(shù)量開始逐漸減少。13用油紅0染色法對(duì)細(xì)胞的分化潛能進(jìn)行鑒定，隨著誘導(dǎo)分化時(shí)間的變化，被染色的細(xì)胞數(shù)量逐漸增加，體積逐漸增大，培養(yǎng)7天后，被染色的細(xì)胞數(shù)量逐漸變少。2豬艄基因的克隆鑒定采用比較基因組學(xué)和RTPCR方法，根據(jù)入和小鼠SMAFl基因的保守序列，設(shè)計(jì)簡(jiǎn)并引物，克隆了豬SMAFl基因cDNA序列，所克隆

5、基因片斷全長(zhǎng)256bp(GenBank登錄號(hào)：DQl91892)，編碼包括81個(gè)氨基酸的完整編碼區(qū)，該序列與人和小鼠SMAFl基因的相似性分別為86％和78％，預(yù)測(cè)的氨基酸序列與人、小鼠、大鼠和牛的相似性分別為81％、67％、70％和84％。3豬SMAFI基因的組織表達(dá)規(guī)律半定量RTPCR分析了豬SMAFl基因在大白豬11種組織中的表達(dá)譜，以及在4月齡瘦肉型豬(大白豬)和脂肪型豬(梅山豬)脂肪組織中的表達(dá)差異。豬SMAFl基因在脂肪組織