化療藥物對正常造血干細(xì)胞的影響及其作用機(jī)制.pdf

1、研究目的:檢測化療藥物對正常小鼠骨髓造血細(xì)胞的影響，尤其是在骨髓造血細(xì)胞自我更新、定向分化中的作用，探討其對造血干細(xì)胞功能的影響及其可能的作用機(jī)制。
　　 研究方法:首先我們根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道建立了2種環(huán)磷酰胺(CTX)處理的動(dòng)物模型，通過定期檢測小鼠外周血以及骨髓細(xì)胞中造血干細(xì)胞(HSCs，LKS+)比例的恢復(fù)情況，確定后期實(shí)驗(yàn)所使用的模型及小鼠骨髓及外周血細(xì)胞數(shù)量完全恢復(fù)所需的時(shí)間;應(yīng)用競爭性移植、非競爭性移植、多色流式細(xì)胞儀分析

2、等實(shí)驗(yàn)，研究化療藥物CTX對造血干細(xì)胞自我更新、定向分化等功能的影響;通過檢測連續(xù)移植模型小鼠骨髓細(xì)胞中p16Ink4a mRNA的相對表達(dá)以及SA-β-gal的染色情況，探討CTX對造血細(xì)胞衰老的影響。
　　 結(jié)果:在所建立的小鼠模型中，CTX處理后小鼠外周血白細(xì)胞數(shù)快速下降，骨髓細(xì)胞中HSCs的比例出現(xiàn)一過性升高，在給藥后的第20天上述參數(shù)以及外周血中的紅細(xì)胞(RBC)、淋巴細(xì)胞(LYM)以及血小板(PLT)都基本恢復(fù)正常，

3、從而達(dá)到造血細(xì)胞數(shù)量完全恢復(fù)的狀態(tài)。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，盡管CTX處理后小鼠造血細(xì)胞數(shù)量能夠完全恢復(fù)，但是卻能導(dǎo)致HSCs功能的長期損傷，降低HSCs的重建能力。在連續(xù)移植模型中，移植了CTX處理組小鼠骨髓BMMNCs的受體小鼠，其BMMNCs呈現(xiàn)p16Ink4amRNA以及SA-β-gal高表達(dá)的情況，而p16Ink4amRNA和SA-β-gal是體現(xiàn)細(xì)胞衰老的兩個(gè)最常用的生物學(xué)指標(biāo)，提示骨髓細(xì)胞的衰老可能在CTX誘導(dǎo)的骨髓功能的損傷中發(fā)