Nephrin、podocin在糖尿病腎病模型鼠中的作用及羅格列酮和洛沙坦對其的影響.pdf

1、研究背景：糖尿病腎病(DN)是糖尿病(DM)最嚴重的血管并發(fā)癥之一，也是導致終末腎衰竭的主要原因。因DN發(fā)病隱匿、病程遷延、早期診斷困難，且臨床上一旦出現(xiàn)大量蛋白尿，則腎臟損害往往難以逆轉(zhuǎn)，患者將因此很快進入尿毒癥期并需靠長期透析或腎移植來維持生命。透析腎移植治療不僅給患者及其家庭、社會帶來巨大經(jīng)濟負擔，而且進入終末期腎臟疾病(ESRD)的DN患者其預后也較非糖尿病患者更差，病死率更高。因此，深入開展DN發(fā)病機制及防治措施的研究不僅是全

2、球醫(yī)學研究的熱點，而且也是我國從事腎臟病研究工作者的責任與義務。 腎小球濾過屏障由腎小球血管內(nèi)皮細胞、基底膜、臟層上皮細胞(足細胞)足突構(gòu)成，DN的主要臨床表現(xiàn)為蛋白尿，當腎小球濾過膜的完整性及其功能發(fā)生改變時則產(chǎn)生蛋白尿，即蛋白尿是反映腎小球濾過屏障對血漿蛋白通透性增高的特征性臨床表現(xiàn)。既往研究者對DN蛋白尿的發(fā)生機制主要從內(nèi)皮細胞、系膜細胞及其基質(zhì)等角度進行研究，而單從腎小球足細胞結(jié)構(gòu)與功能改變角度研究DN發(fā)病機制的文獻報道

3、甚少。近年來，足細胞及其相關分子損傷與DN的關系成為研究熱點。 足細胞足突通過α<,3>β整合素與α-β-dystroglycans鉚釘于腎小球基底膜(GBM)上；相鄰足突之間的裂孔膜是腎小球濾過屏障的重要結(jié)構(gòu)和功能單位，由nephrin、podocin、CD2AP等多種蛋白質(zhì)分子組成。研究表明，足細胞足突結(jié)構(gòu)改變或nephrin表達下調(diào)與DN蛋白尿有關，ACEI和ARB能通過阻止nephrin表達下調(diào)減輕DN蛋白尿；羅格列酮屬

4、TZDs胰島素增敏劑，通過與PPARγ結(jié)合而發(fā)揮作用；研究表明羅格列酮能通過改善腎小球高濾過減少糖尿病腎病微量白蛋白尿，那么，它是否能通過阻止足細胞損傷、維持nephrin的表達水平從而減輕蛋白尿和腎小球硬化?它對DN中podocin的影響如何?至今國內(nèi)外未見相關研究報道。 目的：本研究通過STZ鼠模型制備擬觀察DN大鼠足細胞超微結(jié)構(gòu)及其相關分子nephrin、podocin表達的變化，以及羅格列酮、洛沙坦對其干預的影響，探討足

5、細胞相關分子nephrin、podocin在DN發(fā)病中的作用及PPARy激動劑和ARB治療DN的分子機制，為DN的防治提供理論依據(jù)。 方法：選擇清潔級wistar雄性大鼠35只，隨機分為5組：N組為正常大鼠對照組(n=10)，D組為DN大鼠模型組(11=10)，R組為羅格列酮(文迪雅)干預組(n=10，文迪雅5mg／Kg.d)，L組為洛沙坦(科素亞)干預組(n=10，科素亞50mg／Kg.d)，R+L組為羅格列酮+洛沙坦聯(lián)合干預

6、組(n=5，文迪雅5mg／Kg.d十科素亞50mg／Kg.d)。留24h尿用雙縮脲法檢測尿蛋白定量，心臟取血檢測Scr、血脂等，取腎組織行光鏡常規(guī)及電鏡超微結(jié)構(gòu)檢查，免疫組化法檢測腎臟nephrin、podocin、ColⅣ表達；RT-PCR法檢測nephrin、podocin-mRNA表達。 結(jié)果：與N組比較，DN大鼠D組出現(xiàn)①尿Pro排泄增多，Scr、TG、CHO及血、尿ColⅣ濃度增高(P<0.05或0.01)，Ccr在8

7、周時下降(P<0.01)；②腎組織內(nèi)nephrin、podocin蛋白和mRNA表達下調(diào)(P均

8、組、R+L組則無變化(P>O.05)：③nephrin、podocin蛋白和mRNA表達增加(P

9、，其它方面作用無顯著性差異(P均>O.05)。 結(jié)論：①DN大鼠尿蛋白排泄增多、腎功能異常的同時出現(xiàn)腎組織nephrin,podocin蛋白和mRNA表達減少及C01Ⅳ蛋白表達增多；腎小球足細胞數(shù)目減少、FP增寬甚至融合及GBM增厚。提示DN時存在足細胞分子nephrin、podocin表達異常和超微結(jié)構(gòu)改變。②DN大鼠nephrin、podocin蛋白表達與24小時尿蛋白排泄量及ColⅣ蛋白表達呈負相關、與Scr呈正相關，說明