龍葵堿在結(jié)腸癌HT-29細(xì)胞雞胚移植模型中抗腫瘤作用的研究.pdf

1、目的:
　　通過(guò)建立人結(jié)腸癌 HT-29細(xì)胞雞胚移植模型，研究不同劑量龍葵堿對(duì)人結(jié)腸癌HT-29細(xì)胞誘導(dǎo)的腫瘤血管生成及腫瘤增殖的影響，為龍葵堿抗腫瘤作用提供理論及實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法:
　　選取孵育至9天雞胚，把制備的雞胚絨毛尿囊膜（Chicken embryo villus allantois membrane，CAM）分為對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組（分別加低、中、高三種不同劑量龍葵堿）(n=10)，將培養(yǎng)的人結(jié)腸癌細(xì)胞系HT

2、-29細(xì)胞接種到CAM后第二天，實(shí)驗(yàn)組分別加入劑量150μg/ml、200μg/ml、250μg/ml的龍葵堿，對(duì)照組加入等量的磷酸鹽緩沖液（Phosphate Buffered Saline，PBS）液，每天觀察細(xì)胞移植瘤及血管生長(zhǎng)特性；5天后通過(guò)立體顯微鏡照相、Image-pro plus6.0圖像分析軟件分析圖片，收集數(shù)據(jù)，觀察實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組血管新生面積變化；采用免疫組織化學(xué)方法，檢測(cè)移植瘤中CD34抗原標(biāo)記的腫瘤微血管密度（mi

3、crovessel density，MVD）和ki-67抗原表達(dá)指數(shù)反應(yīng)腫瘤增殖，收集數(shù)據(jù)。觀察不同劑量的龍葵堿對(duì)腫瘤血管生成及腫瘤增殖的影響。
　　結(jié)果:
　　HT-29細(xì)胞接種到CAM第3～5天，大量血管向瘤體集中生長(zhǎng)，部分長(zhǎng)入或跨越瘤體表面，腫瘤也迅速生長(zhǎng)。給藥后第5天進(jìn)行拍照，圖像分析，定量計(jì)算不同劑量龍葵堿給藥后腫瘤血管新生面積分別為（13.21±0.89）、（11.53±0.82）、（8.92±0.79），明顯低

4、于PBS對(duì)照組（22.91±1.45），且呈劑量依賴(lài)性，上述各組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。免疫組織化學(xué)檢查不同劑量龍葵堿給藥組的移植瘤微血管密度分別為（24.45±3.86）、（20.3±3.68）、（16.4±3.51），明顯低于PBS對(duì)照組（37.83±4.03），與血管新生面積表現(xiàn)相一致，且與龍葵堿劑量呈負(fù)相關(guān)（r=-0.789）（P<0.01）；ki-67抗原表達(dá)指數(shù)逐漸下降（34.12±3.48）、（28.24±3.