烏司他丁預(yù)處理對小鼠顱腦損傷保護作用的初步研究.pdf

1、創(chuàng)傷性顱腦損傷(traumatic brain injury,TBI)在臨床上很常見，其死亡率和致殘率非常高。TBI后腦水腫是臨床上多見的癥狀，導(dǎo)致顱內(nèi)壓(intracranial pressure,ICP)增高、腦血流量的下降，甚至腦疝和死亡。為了解決外傷后腦水腫進行性加重引起的ICP增高的難題，近年來國內(nèi)外許多學(xué)者都在尋找治療腦水腫的新靶點。根據(jù)發(fā)病機制的不同，腦水腫分為細胞毒性水腫(cytotoxic edema)和血管源性水腫(

2、vasogenic edema)，文獻回顧發(fā)現(xiàn)水通道蛋白4(aquaporin-4,AQP4)是腦水腫發(fā)生過程中的關(guān)鍵蛋白，TBI后AQP4調(diào)控水進入星形膠質(zhì)細胞引起細胞毒性水腫，同時AQP4參與血管源性水腫發(fā)生和發(fā)展，研究者開始考慮將AQP4作為治療腦水腫的一個目標蛋白。尿胰蛋白酶抑制劑-烏司他丁(urinary trypsin inhibitor，UTI)是存在于人類血液和尿液中的蛋白酶抑制劑，它具有抑制蛋白酶激活、炎性因子釋放、免

3、疫細胞表達及穩(wěn)定溶酶體膜、改善器官循環(huán)等作用。目前UTI在臨床上主要用于治療急性胰腺炎、休克、免疫功能調(diào)節(jié)等疾病，部分學(xué)者已經(jīng)開始研究UTI的腦保護作用。我們前期的工作及國內(nèi)外的相關(guān)報道均證實，UTI具有潛在的腦保護作用，調(diào)節(jié)AQP4的表達可以在TBI后早期改善腦水腫。我們重點探討不同處理，對小鼠腦組織中AQP4表達的影響，為UTI在腦保護方面的研究奠定學(xué)術(shù)基礎(chǔ)。
　　一、小鼠TBI模型的建立
　　目的：建立穩(wěn)定的TBI動物

4、模型。方法：BALB/c小鼠16只，隨機分為分為假手術(shù)組(SO組)、創(chuàng)傷性腦損傷組(TBI組)。肉眼觀察小鼠腦組織外觀，HE染色觀察損傷皮質(zhì)區(qū)神經(jīng)元狀態(tài)，干濕重法(wet/dry,W/D)檢測腦組織含水量。結(jié)果：①肉眼觀察示：TBI模型組小鼠大腦外觀水亮，腦水腫明顯，有散在出血點；②W/D方法分析示：與SO組相比，TBI組腦組織含水量顯著升高(P<0.05)；③光鏡下觀察損傷皮質(zhì)區(qū)HE染色切片示：與SO組相比，TBI組神經(jīng)元細胞數(shù)目明顯

5、減少，細胞核固縮、深染，可見散在炎性滲出。結(jié)論：該TBI動物模型建立成功。
　　二、UTI預(yù)處理對TBI早期的保護作用及對AQP4表達的影響
　　目的：探討烏司他丁(UTI)預(yù)處理對小鼠顱腦損傷早期的保護作用。方法：1．BALB/c小鼠44只，隨機分為假手術(shù)組（SO組）、創(chuàng)傷性腦損傷組(TBI組)、烏司他丁預(yù)處理組(UTI組)和生理鹽水對照組（Control組）。烏司他丁預(yù)處理組連續(xù)3d給予UTI300000U／(kg.d）

6、腹腔注射。2．除SO組外，其余各組應(yīng)用落體打擊法建立TBI模型。3．運用W/D法檢測各組小鼠腦含水量變化。4．運用HE染色技術(shù)觀察各組的組織形態(tài)變化。5．運用Westernblot檢測各組小鼠腦組織中AQP4的表達。6．運用SPSS16.0軟件對數(shù)據(jù)進行處理。結(jié)果：1．W/D法檢測結(jié)果提示：與SO組相比，TBI后腦組織含水量在24h明顯升高，且高于UTI組、Control組；UTI組顱腦損傷早期（24h）腦組織含水量低于TBI組（P<0

7、.05），但高于SO組。2．光鏡下觀察HE切片提示：SO組：神經(jīng)元輪廓呈錐體形或三角形，胞核橢圓形或圓形，藍染，部分神經(jīng)元核中央可見核仁，神經(jīng)膠質(zhì)細胞核深染，數(shù)量少，未見炎性細胞浸潤；TBI組：損傷灶神經(jīng)元輪廓不規(guī)則，神經(jīng)元數(shù)量較SO組減少，胞質(zhì)染色呈強嗜伊紅性，部分胞核形狀不規(guī)則，出現(xiàn)核仁固縮、深染甚至消失，損傷皮質(zhì)區(qū)可見膠質(zhì)細胞及炎性細胞浸潤；UTI組：神經(jīng)元狀態(tài)顯著好于TBI和Control組，固縮、壞死細胞核比例較TBI和Con

8、trol組少。Control和TBI組比較無明顯差異。3．Westernblot結(jié)果分析示：SO組：AQP4穩(wěn)定表達；TBI:在損傷24h，TBI組中AQP4蛋白含量達顯著增高，在TBI早期AQP4表達與腦含水量成正比；UTI:與TBI和Control組相比，在顱腦損傷早期（24h）UTI預(yù)處理組AQP4表達顯著降低（P<0.05），但仍高于SO組。Control與TBI組無明顯差異。結(jié)論1、AQP4在正常腦組織中廣泛表達。2、烏司他丁