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文檔簡介
1、觀察槐杞黃顆粒和孟魯司特鈉(montelukast,MK)干預(yù)哮喘模型大鼠對氣道炎癥、氣道重塑以及白三烯D4(leukotriene D4,LTD4)和白介素17A(interleukin-17A,IL-17)表達(dá)的影響;探討槐杞黃輔助孟魯司特鈉治療哮喘的作用機(jī)制。
方法:
1.取4-6周齡雄性SD大鼠(體重120±10g)40只,隨機(jī)分為5組:對照組(Control)、模型組(Model)、孟魯司特鈉組(M
2、K)、槐杞黃組(H)、孟魯司特鈉+槐杞黃組(MK十H),每組8只。
2.除對照組外,其他各組分別于第1天、第8天腹腔注射0.1%卵清蛋白(ovalbumin,OVA)混合液1ml(含OVA1mg、氫氧化鋁100mg及滅活百日咳桿菌苗5×109個作為免疫佐劑)致敏,第15天開始以1%OVA霧化液8ml隔日1次霧化激發(fā),20分鐘/次,連續(xù)激發(fā)4周建立哮喘模型。對照組致敏激發(fā)均以生理鹽水代替。從第15天開始各干預(yù)組每天分別予以孟
3、魯司特鈉(1mg/100g/d)、槐杞黃(0.4g/100g/d)、孟魯司特鈉(1mg/100g/d)+槐杞黃(0.4g/100g/d)灌胃處理。
3.各組大鼠于末次激發(fā)后24小時(shí)處死,取血漿、支氣管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluids,BALF)及右肺上葉組織。右肺上葉組織制作石蠟切片,行HE染色、Masson染色和AB-PAS染色行病理學(xué)檢查,分析氣道炎癥和氣道重塑情況;免疫組化方法測
4、定肺組織IL-17表達(dá);計(jì)數(shù)BALF細(xì)胞總數(shù)和細(xì)胞分類;ELISA方法測定血漿及BALF上清液中LTD4和IL-17的濃度。
結(jié)果:
1.臨床表現(xiàn):與對照組相比,在激發(fā)過程中,模型組大鼠逐漸出現(xiàn)煩燥不安、撓鼻、呼吸急促、呈點(diǎn)頭狀呼吸、發(fā)紺、活動進(jìn)食減少或俯臥不動、出現(xiàn)豎毛、毛發(fā)失去光澤甚至脫毛、反應(yīng)不敏捷等哮喘樣表現(xiàn)。其它干預(yù)組大鼠癥狀較模型組不同程度減輕,以孟魯司特鈉組及孟魯司特鈉+槐杞黃組改善明顯。
5、> 2.氣道病理學(xué)改變:
1)支氣管周圍炎性細(xì)胞浸潤程度:模型組支氣管周圍炎性細(xì)胞浸潤程度較對照組明顯加重(P<0.05),與模型組比較,各干預(yù)組支氣管周圍炎性細(xì)胞浸潤程度按H組、MK組、MK+H組順序依次減輕(P<0.05)。
2)杯狀細(xì)胞占上皮細(xì)胞百分比:模型組杯狀細(xì)胞占上皮細(xì)胞百分比較對照組明顯升高(P<0.05);各干預(yù)組均較模型組明顯降低(P<0.05):MK組、MK+H組之間比較無顯著性差異
6、,均較H組明顯降低(P<0.05)。
3)膠原沉積面積:模型組膠原沉積面積較對照組明顯增加(P<0.05);MK組、MK+H組之間比較無顯著性差異,均較模型組明顯降低(P<0.05);H組與模型組比較無顯著性差異。
4)平滑肌增生面積:模型組平滑肌增生面積較對照組明顯增加(P<0.05);各干預(yù)組較模型組明顯減少(P<0.05);MK+H組減輕最明顯(P<0.05);MK組與H組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
7、 5)免疫組化:模型組IL-17蛋白表達(dá)量較對照組明顯升高(P<0.05):各干預(yù)組IL-17蛋白表達(dá)量按H組、MK組、MK+H組順序較模型組依次下降(P<0.05)。
3.BALF細(xì)胞總數(shù)和細(xì)胞分類計(jì)數(shù):與對照組比較,模型組BALF中細(xì)胞總數(shù)、嗜酸性粒細(xì)胞(eosinophils,EOS)及中性粒細(xì)胞(neutrophils,NEU)占細(xì)胞總數(shù)百分比均明顯升高(P<0.05);與模型組比較,各干預(yù)組BALF中細(xì)胞總數(shù)、
8、EOS及NEU占細(xì)胞總數(shù)百分比按H組、MK組、MK+H組順序依次下降,但H組中性粒細(xì)胞占細(xì)胞總數(shù)百分比與模型組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;與MK組比較,MK+H組EOS及NEU占細(xì)胞總數(shù)百分比下降無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
4.血漿和BALF LTD4、IL-17濃度:
1)血漿和BALF中LTD4濃度:模型組血漿和BALF中LTD4濃度均高于正常對照組(P<0.05);與模型組比較,各干預(yù)組血漿和BALF中LTD4濃度按H組
9、、MK組、MK+H組順序依次下降,但MK+H組與MK組之間比較無顯著差異,H組血漿LTD4濃度與模型組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
2)血漿和BALF中IL-17濃度:模型組血漿和BALF中IL-17濃度均高于正常對照組(P<0.05);與模型組比較,各干預(yù)組血漿和BALF中IL-17濃度按H組、MK組、MK+H組順序依次下降,但H組與模型組比較下降無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
5.血漿與BALF中IL-17濃度及肺組織IL-1
10、7表達(dá)量呈正相關(guān)(P<0.05);肺組織IL-17表達(dá)量與BALF中EOS占細(xì)胞總數(shù)百分比及NEU占細(xì)胞總數(shù)百分比呈正相關(guān)(P<0.05)。
結(jié)論:
1.哮喘大鼠血漿及BALF中LTD4濃度明顯增高。
2.哮喘大鼠血漿及BALF中IL-17濃度明顯增高,在小支氣管柱狀上皮及炎癥細(xì)胞上IL-17蛋白表達(dá)量明顯增高。
3.血漿IL-17濃度與BALF中IL-17濃度及肺組織IL-17蛋
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