骨髓增生異常綜合征骨髓血管新生及三氧化二砷抗血管新生作用機理研究.pdf

1、第一部分MDS骨髓血管新生及其調(diào)控機制初步研究 【目的】 探討骨髓增生異常綜合征(MDS)患者骨髓是否存在血管新生，及其調(diào)控機制在MDS發(fā)病機制、病情進展及預后判斷中的價值。 【方法】 1、將12例MDS患者根據(jù)病情分成兩組，難治性貧血(RA)、環(huán)狀鐵粒幼細胞增多性難治性貧血(RAS)分為低危組，原始細胞增多性難治性貧血(RAEB)和轉(zhuǎn)化型原始細胞增多性難治性貧血(RAEB．T)為高危組，采用CD34單抗

2、免疫組織化學染色法標記了12例MDS患者和l6例正常人骨髓組織血管內(nèi)皮細胞，盲法計數(shù)骨髓微血管密度(MVD)。 2、用ELISA法測定MDS患者血清中血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)濃度。 3、用流式細胞儀測定MDS患者及正常人骨髓單個核細胞VEGF受體(VEGFRl和VEGFR2)的表達。 【結(jié)果】 1、MVD結(jié)果：MDS患者骨髓微血管密度(MVD)顯著高于正常對照組(P

3、正常對照組(PO.05)。隨MVD的增高VEGF水平呈升高趨勢(P

4、能是由惡性細胞與血管內(nèi)皮細胞共同分泌的。 3、VEGFRl和VEGFR2表達率：VEGFRl陽性表達率結(jié)果顯示：慢粒組>MDS高危組>MDS低危組>正常組(PO.05)；因此提示患者VEGFR表達水平與疾病病程有密切關系。 4、MDS、HL60、K562細胞株可見VEGFRl以

5、K562細胞株表達最高(65.59％)，其次是MDS細胞株(39.82％)，HL60細胞株表達最少(17.52％)。而VEGFR2MDS細胞株表達最高(28．53％)，其次是K562細胞株(14.91％)，HL60細胞株表達最少(11.22％)。 【結(jié)論】 1、MDS患者存在骨髓微血管密度增高，并與MDS患者的疾病進展正相關，血管新生在MDS的發(fā)生發(fā)展中起到重要作用；2、MDS患者血清中VEGF濃度和VEGFRl陽性表達

6、增高也與骨髓微血管密度正相關，提示二者在參與MDS的血管新生中起重要作用。3、VEGFR2表達率與正常組無統(tǒng)計學差異 第二部分AS203抗血管新生作用機理的體外研究 【目的】 研究三氧化二砷(As203)通過抑制人臍靜脈內(nèi)皮細胞(HUVEC)生長，下調(diào)HUVEC細胞株及SKM．1細胞株VEGFmRNA表達來起到抗血管新生作用。 【方法】 1.研究對象：研究對象為HUVEC和SKM．1細胞株(MDS

7、RAEB)。 2．實驗分組：A組是不同濃度的As203與HUVEC共同孵育；B組是HUVEC與SKM．1細胞株的培養(yǎng)上清液共同培養(yǎng)；C組是SKM．1細胞。 3．A、B組與不同濃度的A8203共同孵育3天后，觀察細胞形態(tài)變化，用四唑鹽比色法(MTT)繪制細胞生長曲線圖，計算細胞生長抑制率，研究As203對它的生長抑制作用。 4．不同濃度的As203分別干預A組、B組和C組共同孵育1天后，用逆轉(zhuǎn)錄．聚合酶鏈反應(RT

8、-PCR)擴增VEGF基因片段，分析VEGFmRNA表達變化。 5．相同濃度的As203分別干預A、B、C三組12、24、36、48、60、72小時后，用逆轉(zhuǎn)錄．聚合酶鏈反應(RT-PCR)擴增VEGF基因片段，分析VEGFmRNA表達變化。 【結(jié)果】 1．低濃度的As203(0-1.51μmol/1)對A組和B組均無明顯生長抑制作用(F=O.324，P>0.05)；相對高濃度(3-481μmol/1)的As20

9、3處理A組和B組均有明顯生長抑制作用，藥物濃度與細胞抑制率呈正相關(P<0.05)。 2．As203作用于A組和B組不同時間，其生長抑制作用隨著藥物作用時間增加細胞抑制作用也逐漸明顯(F=10.92，P<0.01)。 3．HUVEC中加入SKM-l上清液共同培養(yǎng)對促進細胞生長有明顯作用(F=28，P<0.01)。 4．通過分析VEGFmRNA隨As203作用濃度和時間改變表達發(fā)生相應變化，分析認為： (1

10、)B組VEGFmRNA表達顯著高于A組(t=3.402，P<0.05)； (2)隨As203作用濃度和時間的增加，A、B、C三組的VEGFmRNA表達均逐漸下降，呈顯著的負性相關關系(P<0.05)。 【結(jié)論】 三氧化二砷以時間-劑量依賴性方式抑制HUVEC細胞的生長，并且下調(diào)它和SKM.1細胞的VEGFmRNA的表達；MDS細胞本身VEGFmRNA高表達，并且它可促進HUVEC細胞增殖和VEGFmRNA表達。因