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1、目的:構(gòu)建含人乳腺癌DF3/MUC1啟動子轉(zhuǎn)錄調(diào)控序列和白喉外毒素A鏈(DTA)基因的重組表達(dá)載體,同時探討轉(zhuǎn)入靶向DF3/MUC1的白喉毒素A鏈(DTA)基因?qū)θ橄侔┘?xì)胞生物學(xué)行為的影響。 方法:利用PCR技術(shù)從人乳腺癌細(xì)胞MCF-7中擴(kuò)增出DF3/MUC1啟動子的轉(zhuǎn)錄調(diào)控序列并克隆入pGL3-Basic載體,構(gòu)建重組質(zhì)粒pGL3-DF3,將其瞬時轉(zhuǎn)染DF3陽性的乳腺癌細(xì)胞株MCF-7和DF3陰性的乳腺癌細(xì)胞株 MDA
2、-MB-231,熒光素酶定量分析檢測啟動子的活性。從質(zhì)粒pIBI30-DTA中切下DTA片斷,以DTA基因替換重組質(zhì)粒pGL3-DF3中的蟲熒光素酶基因,構(gòu)建重組質(zhì)粒pGL3-DF3-DTA。將構(gòu)建的pGL3-DF3-DTA真核表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染DF3陽性的乳腺癌細(xì)胞系,轉(zhuǎn)染經(jīng)RT-PCR證實(shí)目的基因已轉(zhuǎn)入細(xì)胞內(nèi),24h后對轉(zhuǎn)入基因的腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)行為進(jìn)行觀察。 結(jié)果:成功地構(gòu)建了含人乳腺癌DF3/MUC1啟動子轉(zhuǎn)錄調(diào)控序列和DTA
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