柴胡皂苷a對顱腦創(chuàng)傷后大鼠認(rèn)知功能的保護(hù)作用及其機(jī)制的研究.pdf

1、第一部分顱腦創(chuàng)傷后炎性反應(yīng)對大鼠認(rèn)知功能的影響及其機(jī)制的初步研究
　　目的：
　　顱腦創(chuàng)傷在各部位的創(chuàng)傷造成的死殘中居第1位。在我國,顱腦創(chuàng)傷每年大概發(fā)生超過100萬人次,其中死亡和嚴(yán)重殘疾患者超過10萬人,其中長期昏迷和植物生存就超過1萬人,造成的直接及間接經(jīng)濟(jì)損失達(dá)數(shù)百億元。顱腦創(chuàng)傷后的認(rèn)知障礙被認(rèn)為是最嚴(yán)重、持續(xù)時間最長的癥狀之一,經(jīng)常體現(xiàn)為注意力及記憶力的改變,然而對于顱腦創(chuàng)傷后認(rèn)知障礙的確切機(jī)制仍不清楚。顱腦創(chuàng)傷后

2、的炎性反應(yīng)在繼發(fā)性腦損傷中起重要的作用。本實驗的目的在于觀察顱腦創(chuàng)傷后大鼠認(rèn)知功能的改變,并初步探討炎性反應(yīng)在對認(rèn)知功能產(chǎn)生影響中的可能機(jī)制。
　　方法：
　　采用皮層可控性打擊(controlled cortical impact,CCI)裝置建立大鼠中度顱腦損傷模型,隨機(jī)將實驗動物分為假手術(shù)組和損傷組,利用18分的Chen評分法評價打擊后的大鼠神經(jīng)功能缺損程度(neurological deficit score,NSS

3、);利用磁共振成像(MRI)監(jiān)測打擊側(cè)腦組織的損傷體積;Morris水迷宮用于測定實驗大鼠的認(rèn)知功能;利用酶聯(lián)免疫吸附劑測定法測定腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和白介素-6(interleukin-6,IL-6);采用同樣的方法對腦源性神經(jīng)生長因子(brain derived neurophic factor,BDNF)進(jìn)行測定,并采用方差分析方法進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析,p<0.05表示有統(tǒng)計學(xué)差

4、異。
　　結(jié)果：
　　成功建立大鼠的中度皮層可控性打擊損傷模型,NSS顯示顱腦創(chuàng)傷后大鼠的神經(jīng)功能和假手術(shù)組相比較缺損明顯,MRI的T2加權(quán)像顯示打擊側(cè)的腦組織損傷明顯,Morris水迷宮顯示顱腦創(chuàng)傷后大鼠的認(rèn)知功能和假手術(shù)組相比較下降明顯,具有明顯的統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.05);同時顱腦創(chuàng)傷后的實驗大鼠打擊側(cè)的海馬組織中TNF-α及IL-6的水平較假手術(shù)組明顯升高,具有統(tǒng)計學(xué)差異(p<0.05);而損傷組大鼠打擊側(cè)的海馬組織

5、中BDNF的水平較假手術(shù)組明顯下降,并且具有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.05)。
　　結(jié)論：
　　本實驗初步證實炎性反應(yīng)參與顱腦創(chuàng)傷后大鼠認(rèn)知功能改變的發(fā)生過程,同時與認(rèn)知功能密切相關(guān)的BDNF可能參與其中。
　　第二部分柴胡皂苷a對顱腦創(chuàng)傷后大鼠認(rèn)知功能的保護(hù)作用
　　目的
　　顱腦創(chuàng)傷在各部位的創(chuàng)傷造成的死殘中居第1位。在我國,顱腦創(chuàng)傷每年大概發(fā)生超過100萬人次,其中死亡和嚴(yán)重殘疾患者超過10萬人,其中長期昏

6、迷和植物生存就超過1萬人,造成的直接及間接經(jīng)濟(jì)損失達(dá)數(shù)百億元。顱腦創(chuàng)傷后的認(rèn)知障礙被認(rèn)為是最嚴(yán)重、持續(xù)時間最長的癥狀之一,經(jīng)常體現(xiàn)為注意力及記憶力的改變,然而對于顱腦創(chuàng)傷后認(rèn)知障礙的確切機(jī)制仍不清楚。顱腦創(chuàng)傷后的炎性反應(yīng)在繼發(fā)性腦損傷中起重要的作用。顱腦創(chuàng)傷后的炎性反應(yīng)參與了與認(rèn)知相關(guān)的神經(jīng)遞質(zhì)的調(diào)節(jié)。炎性反應(yīng)被認(rèn)為是顱腦創(chuàng)傷后認(rèn)知障礙中的重要機(jī)制。近年來人們發(fā)現(xiàn)柴胡皂苷a(Saikosaponin a,SSa)具有極強(qiáng)的抗炎作用。本實

7、驗的目的在于觀察柴胡皂苷a對顱腦創(chuàng)傷后大鼠認(rèn)知功能的保護(hù)作用。
　　方法
　　采用皮層可控性打擊(controlled cortical impact,CCI)裝置建立大鼠中度顱腦損傷模型,隨機(jī)將實驗動物分為假手術(shù)組,損傷+生理鹽水組和損傷+柴胡皂苷a組,利用18分的Chen評分法評價打擊后的大鼠神經(jīng)功能缺損程度(neurological deficit score,NSS);利用磁共振成像(MRI)監(jiān)測打擊側(cè)腦組織的損傷體

8、積;Morris水迷宮用于測定實驗大鼠的認(rèn)知功能;利用酶聯(lián)免疫吸附劑測定法測定腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和白介素-6(interleukin-6,IL-6);采用同樣的方法對腦源性神經(jīng)生長因子(brain derived neurophic factor,BDNF)和環(huán)磷酸腺苷(cyclic AMP,cAMP)進(jìn)行測定,;采用Western Blot方法分別測定打擊側(cè)海馬組織中與認(rèn)知相

9、關(guān)蛋白的水平,包括磷酸化的環(huán)磷酸腺苷反應(yīng)元件結(jié)合蛋白(phosphorylation-cAMP-response element binding protein,pCREB),環(huán)磷酸腺苷反應(yīng)元件結(jié)合蛋白(cAMP-response element binding protein,CREB),并采用方差分析方法進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析,p<0.05表示有統(tǒng)計學(xué)差異。
　　結(jié)果
　　成功建立大鼠的中度皮層可控性打擊損傷模型,NSS顯示顱腦

10、創(chuàng)傷后大鼠的神經(jīng)功能和假手術(shù)組相比較缺損明顯,MRI的T2加權(quán)像顯示打擊側(cè)的腦組織損傷明顯,Morris水迷宮顯示顱腦創(chuàng)傷后大鼠的認(rèn)知功能和假手術(shù)組相比較下降明顯,具有明顯的統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.05);同時顱腦創(chuàng)傷后大鼠打擊側(cè)的海馬組織中TNF-α及IL-6水平較假手術(shù)組明顯升高,具有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.05);而損傷組大鼠打擊側(cè)的海馬組織中BDNF、pCREB和CREB的水平較假手術(shù)組明顯下降,并且具有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.05)。腹腔

11、內(nèi)注射柴胡皂苷a能夠明顯改善顱腦創(chuàng)傷后大鼠的神經(jīng)功能缺損情況,減少打擊側(cè)腦組織的損傷體積,改善認(rèn)知功能;減少打擊側(cè)海馬組織中TNF-α及IL-6的含量;同時伴有BDNF、pCREB和CREB等認(rèn)知相關(guān)蛋白含量的升高。
　　結(jié)論
　　腹腔內(nèi)注射柴胡皂苷a能夠通過抑制炎性反應(yīng),提升機(jī)體抗炎能力,改善顱腦創(chuàng)傷后大鼠的神經(jīng)功能和認(rèn)知功能,同時可提高與認(rèn)知相關(guān)的蛋白水平。柴胡皂苷a可以改善顱腦創(chuàng)傷后的認(rèn)知功能障礙。柴胡皂苷a是一種安全