柴胡皂苷d對(duì)阻塞性黃疸大鼠肝細(xì)胞游離鈣及STIM1調(diào)控機(jī)制的研究.pdf

1、目的：
　　 觀察柴胡皂苷d(saikosaponin-d,SSd)對(duì)阻塞性黃疸大鼠肝組織保護(hù)作用及膽汁酸代謝的影響,觀察阻黃大鼠肝組織中基質(zhì)交聯(lián)分子1(stromal interactionmolecule l,STIM1)基因、蛋白表達(dá)以及肝細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的變化,觀察SSd對(duì)阻黃大鼠肝組織中STIM1基因、蛋白表達(dá)以及肝細(xì)胞鈣離子濃度的影響,進(jìn)一步研究SSd對(duì)STIM1表達(dá)和肝細(xì)胞鈣離子代謝的調(diào)控機(jī)制。
　　 方法

2、：
　　 將108只雄性SD大鼠隨機(jī)分為6組:假手術(shù)對(duì)照+生理鹽水組(SO+NS)、膽總管結(jié)扎+生理鹽水組(BDL+NS)、膽總管結(jié)扎+?；切苋パ跄懰峤M(BDL+TUDCA)、膽總管結(jié)扎+高、中、低劑量柴胡皂苷d組(BDL+High/Medium/Low-dose SSd),同時(shí)各組隨機(jī)分7、14、21天三個(gè)時(shí)段組,每時(shí)段每組6只。SO+NS組和BDL+NS組每天腹腔注射生理鹽水;BDL+TUDCA組每天按20mg,kg劑量予以

3、腹腔注射;BDL+SSd組分別每天按1.0mg/kg、1.5mg/kg、2.0mg/kg劑量腹腔注射,分別連續(xù)給藥7天、14天、2l天,于各時(shí)段末處死該時(shí)段組大鼠,剖腹取肝組織和血液標(biāo)本,用光學(xué)顯微鏡觀察大鼠肝組織病理變化;檢測血液生化指標(biāo)TBA、TB、DB、ALT;應(yīng)用流式細(xì)胞儀通過熒光指示劑Fluo-3/AM測定肝細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度;逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測STIMl的mRNA表達(dá);免疫組化法檢測肝組織中STIM1表達(dá),

4、用美國Image Pro Plus專業(yè)圖像分析軟件對(duì)其進(jìn)行分析。
　　 結(jié)果：
　　 1、光學(xué)顯微鏡下,HE染色結(jié)果顯示,SO+NS組各時(shí)間段肝小葉結(jié)構(gòu)、肝細(xì)胞形態(tài)正常,肝竇無擴(kuò)張充血,中央靜脈及匯管區(qū)無明顯異常;7天末BDL+NS組肝細(xì)胞出現(xiàn)點(diǎn)狀壞死,匯管區(qū)或中心靜脈區(qū)可見少量纖維增生;BDL+TUDCA及BDL+SSd組除個(gè)別標(biāo)本肝細(xì)胞出現(xiàn)輕微壞死,無明顯變化;14天末BDL+NS組肝小葉開始出現(xiàn)多個(gè)壞死灶,肝細(xì)胞壞

5、死脫失,周圍伴炎性細(xì)胞浸潤,竇周纖維化出現(xiàn),匯管區(qū)和中心靜脈區(qū)纖維間隔明顯增生;BDL+TUCA組與BDL+SSd組壞死、增生程度較為減輕,且中、高劑量明顯減輕:21天末BDL+NS組肝細(xì)胞壞死、周圍組織增生更加明顯:BDL+nJDCA組及低劑量SSd組病理改變與BDL+NS組相比較輕,中、高劑量SSd組與BDL+NS組比較壞死纖維化程度明顯減輕,纖維間隔較薄,炎性浸潤較少。
　　 2、TBA、TB、DB、AUT測定結(jié)果:SO+

6、NS組各時(shí)間段無明顯變化;BDL+NS組7天、14天、21天各時(shí)相點(diǎn)各值明顯增高:BDL+TUDCA組與BDL+SSd組在各時(shí)相點(diǎn)各值也出現(xiàn)不同程度升高,但較同時(shí)間段BDL+NS組明顯減低(P＜0.05),其中中、高劑量SSd組顯著降低(P＜0.01)。
　　 3、流式細(xì)胞儀結(jié)合熒光指示劑Fluo-3/AM檢測肝細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度:與SO+NS組比較,BDL+NS組、BDL+TUDCA組、BDL+SSd組均可引起細(xì)胞內(nèi)平均熒光強(qiáng)度

7、(MFI)不同程度增高;與BDL+NS組比較,TUDCA組及各濃度SSd組MFI值明顯降低(P＜0.05),中、高濃度SSd組下降顯著(P＜0.01):與陽性對(duì)照治療組(BDL+TUDCA)比較,中、高濃度SSd組鈣離子水平明顯低于陽性對(duì)照組(P＜0.05)。
　　 4、半定量RT-PCR檢測STIMl基因mRNA表達(dá):與SO組兩兩對(duì)比,7天末BDL組與SO組無明顯差異(P＞0.05),14、21天末則明顯低于SO組(P＜0.0

8、5);21天末TUDCA組、SSd低濃度組與SO組無明顯差異(P＞0.05),其他時(shí)間段藥物組STIM1表達(dá)明顯增強(qiáng)(P＜0.05),中、高濃度SSd組顯著增強(qiáng)(P＜0.01);BDL+NS組各時(shí)段組表達(dá)隨時(shí)間減弱,兩兩比較差異明顯(P＜0.05);TUDCA組表達(dá)與低濃度SSd組無明顯差異(P＞0.05),低于中、高濃度SSd組,兩兩比較差異明顯(P＜0.05);高濃度SSd組差異顯著(P＜0.01)。
　　 5、免疫組化法檢

9、測STIMI在肝細(xì)胞內(nèi)表達(dá)情況:SO+NS組在不同時(shí)間段肝組織顯示為少量表達(dá)STIM1:BDL+NS組肝組織STIMI蛋白微弱或不表達(dá);與SO組相比,BDL+TUDCA組及SSd各濃度組肝組織均有顯著的STIM1表達(dá)(P＜0.01),主要見于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)質(zhì)網(wǎng);同時(shí)間段TUDCA組表達(dá)強(qiáng)于低濃度SSd組,低于中、高濃度SSd組,兩兩比較差異明顯(P＜0.05),高濃度SSd組差異顯著(P＜0.01)。
　　 結(jié)論：
　　 1、