黃芪提取物干預(yù)食管癌細(xì)胞Ec9706-cDDP GST-π的研究.pdf

1、目的：食管惡性腫瘤的發(fā)病率較高，在現(xiàn)有的治療手段中，手術(shù)治療和放射治療是疾病初期常用的，預(yù)后較好的治療方法，然而大多數(shù)病例在確診時已屬于是終末期，沒有了手術(shù)治療和放射治療的指證，所以化學(xué)藥物治療占有著十分重要的意義。但是這一療法往往出現(xiàn)耐藥，不利于病人的療效和遠(yuǎn)期的預(yù)后。
　　生物體內(nèi)的代謝解毒酶：谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶(GST-π)是在自然界中廣泛存在于生物體內(nèi)的一種生物的化學(xué)反應(yīng)的加速劑。在谷胱甘肽上可與巰基以及有電子極性的物質(zhì)結(jié)合，

2、導(dǎo)致新生成的物質(zhì)親水性較原來提高，從而使其在水中溶解度加大，易于從體內(nèi)排出。谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶屬于體內(nèi)催化劑的一種。細(xì)胞通過這種酶的催化作用，可以將有毒物質(zhì)變的對細(xì)胞沒有毒性作用。到目前為止，許多惡性腫瘤產(chǎn)生原發(fā)性或繼發(fā)性耐藥機理的研究都與GST-π相關(guān)。
　　黃芪為豆科植物，入藥的部位為其根部。有固護衛(wèi)表、補益中氣，消除水腫的功效?？捎糜趷盒阅[瘤的治療，近些年的研究表明，由黃芪組成的方藥在體外對不同的惡變細(xì)胞均有延緩增殖的作用，其藥

3、理作用以及臨床經(jīng)驗被臨床醫(yī)生所重視。本項目用Ec9706/cDDP細(xì)胞系做為研究的對象，運用可以量化的指標(biāo)，來觀察黃芪的提取物是否可以通過減少耐順鉑的食管惡性腫瘤細(xì)胞的谷胱甘肽還原酶的表達，來達到減少細(xì)胞耐藥的目的，為祖國醫(yī)學(xué)的傳統(tǒng)療法提供現(xiàn)代科學(xué)依據(jù)。
　　方法：1、在含0.5ug/ml順鉑的RPMI-1640培養(yǎng)基中培養(yǎng) Ec9706/cDDP的細(xì)胞；用MTT的方法來檢測黃芪提取物的細(xì)胞的毒性作用，找到無毒的濃度進行細(xì)胞的逆轉(zhuǎn)

4、的耐藥試驗；用MTT的方法來檢測Ec9706/cDDP中添加與不添加黃芪提取物（AE）培養(yǎng)48h后細(xì)胞存活率的高低，用線性回歸處理兩組數(shù)據(jù)，算出不同的半數(shù)的抑制的濃度(IC50)差異，計算出逆轉(zhuǎn)的倍數(shù)等于對照組 IC50/試驗組IC50。2、將不同的細(xì)胞系分為實驗和對照兩組，實驗組用黃芪的提取物進行干預(yù)，對照組加入細(xì)胞培養(yǎng)液，用 RT-PCR的方法來檢測兩組細(xì)胞的GST-π的表達。3、采用SPSS13.0對所得的實驗數(shù)值進行處理，以x±

5、S表示，用直線回歸計算IC50，不同組數(shù)據(jù)間的比較，采用t檢驗。
　　結(jié)果：1、黃芪提取物對 Ec9706/cDDP的細(xì)胞的細(xì)胞毒作用與黃芪提取物的濃度有關(guān)。濃度為分別為1ug/ml、5ug/ml、10ug/ml組與對照組的抑制率在統(tǒng)計學(xué)上無差異，黃芪提取物濃度為100ug/ml，1mg/ml組間的抑制率不同分別表示為18.4％，29.8%相比較對照組有統(tǒng)計學(xué)意義。所以選則無毒黃芪提取物濃度為10ug/ml為逆轉(zhuǎn)的實驗用濃度。2、

6、順鉑的單獨作用，順鉑對Ec9706/cDDP的IC50濃度為43.59ug/ml，順鉑與無細(xì)胞毒性劑量10ug/ml的黃芪提取物共同作用，DDP對Ec9706/cDDP的IC50的濃度降低至26.27 ug/ml，逆轉(zhuǎn)倍數(shù)為1.66。3、于A組10個樣本中，8個GST-π基因呈高表達水平，2個為低表達水平；B組10個樣本中，1個GST-π基因呈高表達水平，9個為低表達水平。用統(tǒng)計學(xué)的方法將兩組數(shù)據(jù)處理后可以得知，A、B兩組樣本的GST-