肝細胞生長因子基因轉染的骨髓間充質干細胞修復大鼠肺氣腫病變的實驗研究.pdf

1、目的1.構建能夠較長時間表達人肝細胞生長因子的大鼠骨髓間充質干細胞。
　　 2.利用攜帶人肝細胞生長因子基因的大鼠骨髓間充質干細胞作用肺氣腫大鼠，評價其在治療大鼠肺氣腫病變中的作用，及初步探討相關修復機制。為肺氣腫基因及干細胞治療的提供理論依據(jù)及實驗基礎。
　　 方法1.第一部分體外分離，培養(yǎng)，鑒定大鼠MSCs，在不同MOI下，Ad-GFP轉染MSCs，共聚焦顯微鏡下評價轉染效率，篩選出最佳轉染強度，在最佳轉染強度時將A

2、d-HGF轉染MSCs，并用ELISA法測定轉染后MSCs的hHGF表達水平，并用MTT發(fā)測定Ad-GFP轉染MSCs對其增殖的影響。
　　 2.第二部分體內利用肝細胞生長因子基因修飾的MSCs對大鼠肺氣腫模型進行轉基因干細胞移植治療。32只wistar大鼠隨機分為4組：健康對照組(A組)，病理對照組(B組)，MSCs治療組(C組)，Ad-HGF轉染MSCs組(D組)，單純被動煙熏法復制大鼠肺氣腫模型，通過尾靜脈給予生理鹽水，M

3、SCs，MSC/HGF。4周后觀察大鼠動脈血氣，肺部病理變化，免疫組化分析肺部細胞增殖及血管密度變化，TENEL法測定肺部細胞凋亡情況。另外免疫熒光雙染測定MSCs在肺部的定居及分化，同時觀察Ad-GFP轉染的MSC在肺氣腫大鼠體內向肺部的定向遷移及外源基因表達情況。
　　 結果1.成功分離，培養(yǎng)，鑒定大鼠骨髓間充質干細胞
　　 2.在感染濃度MOI=200時，Ad-GFP轉染MSCs達到最高轉染效率，Ad-HGF成功轉

4、染MSCs，hHGF持續(xù)表達120h，在48h時，表達量最高。
　　 3.Ad-GFP轉染MSCs不會影響MSCs的活性，及在肺氣腫大鼠肺部的定向遷移，并GFF基因在肺部成功表達。
　　 4.免疫熒光雙染顯示，部分MSCs在大鼠肺部分化為肺上皮細胞。
　　 5.動脈血氣分析，治療組(C組，D組)氧飽和度，氧分壓較病理對組明顯改善(P＜0.05)，且MSCs/HGF更具優(yōu)勢。
　　 6.肺病理及免疫組化分析

5、：治療組(C組，D組)平均肺泡數(shù)，肺實質比，細胞增殖指數(shù)(PI)，平均血管密度明顯增加(P＜0.05)；平均肺泡面積，平均內襯間隔，肺部細胞凋亡指數(shù)(AI)明顯減少(P＜0.05)，并且MSCs/HGF治療效果更明顯(P＜0.05)。
　　 結論1.MSCs是一種理想的基因載體細胞，可用于肝細胞生長因子的基因治療。
　　 2.Ad-GFP轉染MSCs，可以定向遷移到肺氣腫大鼠肺部，且外源基因得到表達。
　　 3.