正反義人骨唾液酸蛋白基因在骨肉瘤細胞中的表達及對瘤細胞粘附侵襲行為的影響.pdf

1、孝中科教大署博士學位論文Jj一成義人骨睡渡酸蛋向基l川存?zhèn)H肉瘤自I『胞中fr：J表達蓯劉!_f細胞粘5fj佳襲行為的影響申請^址輯指導敬ll_lI學科專、№研究方向論衛(wèi)蓮止h州黃濤啡宣民教接外科學t矯)B，科)嗣腫蠕2f104q：i’，幾車2096q1RH硝躋睢t≯院礬亂牛部()【】^印∞月華中科技大學『n1濟醫(yī)學院博士學位論文正反義人骨唾液酸蛋白基因在骨肉瘤細胞中的表達及對瘤細胞粘附侵襲行為的影響中文摘要【摘要】：目的構建正、反義人骨

2、唾液酸蛋白基因真核表達載體，為進一步研究人BSP的生物學作用奠定實驗基礎；檢測人骨唾液酸蛋白正、反義真核表達載體在骨肉瘤細胞MG63中的表達；初步探討人骨唾液酸蛋白正、反義真核表達載體在骨肉瘤粘附侵襲行為中的作用。方法以RTPCR方法從人骨膜的總RNA中擴增出hBSP的開放閱讀框序列，與克隆載體pUCm刖掛行連接，構成克隆質粒。利用引物兩端所設計的不同酶切位點將正反義目的片段定向亞克隆到真核表達載體plRF強2一EGFP，將重組后的質粒

3、進行細菌轉化，質粒擴增、純化后，酶切、測序證實其中有目的片段完整插入。分別將正義、反義和空質粒以脂質體介導轉染入MG一63細胞，通過RTPCR檢測各組細胞中hBSPmRNA表達，通過Westernblot檢測各組細胞中hBSP蛋白表達。MTI法懨0定轉染細胞在細胞外基質上的粘附情況，重組基底膜侵襲實驗測定BSP對骨肉瘤細胞侵襲力的影響，細胞劃痕實驗測定轉染BSP質粒對瘤細胞遷移情況的影響。結果從人骨膜細胞中成功擴增出hBSP的開放閱讀框

4、序列，與pUCmTJ奎接構建成功BSP克隆質粒，通過亞克隆過程，與pIRES2EGFP真核表達載體連接，成功構建了人BSP正反、義核酸真核表達載體，轉染骨肉瘤細胞后能夠有效表達hBSP，與對照組相比，正義轉染組高表達hBSP，瘤細胞粘附率提高(PO05)，侵襲力增強(PO05)，遷移速度增快(PO05)。反義轉染組低表達hBSP，瘤細胞粘附率降低護O05)，侵襲力受到抑制∞O01)，遷移速度減慢(PO05)。而空質粒轉染組細胞和未處理瘤