IL-17對小鼠黑色素瘤細胞體外VEGF-a表達和血管生成擬態(tài)的影響.pdf

1、目的：
　　 在前期研究的基礎(chǔ)上，通過體外實驗探討IL-17對B16細胞血管內(nèi)皮生長因子(vascularendothelial growth factor，VEGF)-a表達水平和對B16細胞血管生成擬態(tài)(vasculogenic mimicry，VM)的影響，從而闡明IL-17對黑色素瘤血管生成的影響。
　　 方法：
　　 體外培養(yǎng)小鼠黑色素瘤B16細胞，用不同濃度重組鼠IL-17處理細胞，設(shè)空白對照組。分別

2、采用MTT法和ELISA法檢測不同濃度IL-17對B16細胞增殖能力和VEGF-a表達水平的影響;通過Transwell遷移、侵襲實驗，明膠酶譜法和三維培養(yǎng)實驗觀察不同濃度IL-17對B16細胞遷移、侵襲能力，MMP-2、MMP-9和VM形成能力的影響;通過Western-blot和免疫熒光染色法檢測B16細胞中IL-17受體(IL-17 receptor，IL-17R)的表達情況。
　　 結(jié)果：
　　 1.MTT法檢測

3、結(jié)果顯示，不同濃度(5、10、20、50、100ng/mL) IL-17處理組與對照組相比，B16細胞的增殖能力無明顯變化(P＞0.05);ELISA法檢測結(jié)果顯示，不同濃度(10、50、100ng/mL) IL-17處理的B16細胞培養(yǎng)上清液中VEGF-a含量比對照組升高(P＜0.05)，呈濃度依賴性。
　　 2.觀察不同濃度IL-17(10、50、100ng/mL)對B16細胞遷移、侵襲能力，MMP-2和MMP-9活性及VM

4、的影響。Transwell遷移實驗結(jié)果顯示，不同濃度IL-17處理的B16細胞穿膜細胞數(shù)比對照組明顯增多(P＜0.05)，呈濃度依賴性;Transwell侵襲實驗結(jié)果顯示，不同濃度IL-17處理的B16細胞穿膜細胞數(shù)比對照組明顯增多(P＜0.05)，呈濃度依賴性;明膠酶譜法分析結(jié)果顯示，不同濃度IL-17處理的B16細胞MMP-9的活性比對照組增強(P＜0.05)，呈濃度依賴性，10ng/mL IL-17組MMP-2活性無明顯變化(P＞

5、0.05)，50、100ng/mLIL-17組MMP-2活性增強(P＜0.05);三維培養(yǎng)結(jié)果顯示，不同濃度IL-17處理的B16細胞體外VM形成能力與對照組相比無明顯變化（P＞0.05）。
　　 3.Western-blot檢測結(jié)果顯示B16細胞高表達IL-17R，免疫熒光染色顯示B16細胞中可見IL-17R的陽性表達，IL-17R主要定位表達于胞膜和胞漿。
　　 結(jié)論：
　　 1.IL-17可以誘導(dǎo)B16細胞