IL-17對(duì)小鼠黑色素瘤細(xì)胞體外VEGF-a表達(dá)和血管生成擬態(tài)的影響.pdf

1、目的：
　　 在前期研究的基礎(chǔ)上，通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)探討IL-17對(duì)B16細(xì)胞血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascularendothelial growth factor，VEGF)-a表達(dá)水平和對(duì)B16細(xì)胞血管生成擬態(tài)(vasculogenic mimicry，VM)的影響，從而闡明IL-17對(duì)黑色素瘤血管生成的影響。
　　 方法：
　　 體外培養(yǎng)小鼠黑色素瘤B16細(xì)胞，用不同濃度重組鼠IL-17處理細(xì)胞，設(shè)空白對(duì)照組。分別

2、采用MTT法和ELISA法檢測(cè)不同濃度IL-17對(duì)B16細(xì)胞增殖能力和VEGF-a表達(dá)水平的影響;通過(guò)Transwell遷移、侵襲實(shí)驗(yàn)，明膠酶譜法和三維培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)觀察不同濃度IL-17對(duì)B16細(xì)胞遷移、侵襲能力，MMP-2、MMP-9和VM形成能力的影響;通過(guò)Western-blot和免疫熒光染色法檢測(cè)B16細(xì)胞中IL-17受體(IL-17 receptor，IL-17R)的表達(dá)情況。
　　 結(jié)果：
　　 1.MTT法檢測(cè)

3、結(jié)果顯示，不同濃度(5、10、20、50、100ng/mL) IL-17處理組與對(duì)照組相比，B16細(xì)胞的增殖能力無(wú)明顯變化(P＞0.05);ELISA法檢測(cè)結(jié)果顯示，不同濃度(10、50、100ng/mL) IL-17處理的B16細(xì)胞培養(yǎng)上清液中VEGF-a含量比對(duì)照組升高(P＜0.05)，呈濃度依賴性。
　　 2.觀察不同濃度IL-17(10、50、100ng/mL)對(duì)B16細(xì)胞遷移、侵襲能力，MMP-2和MMP-9活性及VM

4、的影響。Transwell遷移實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，不同濃度IL-17處理的B16細(xì)胞穿膜細(xì)胞數(shù)比對(duì)照組明顯增多(P＜0.05)，呈濃度依賴性;Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，不同濃度IL-17處理的B16細(xì)胞穿膜細(xì)胞數(shù)比對(duì)照組明顯增多(P＜0.05)，呈濃度依賴性;明膠酶譜法分析結(jié)果顯示，不同濃度IL-17處理的B16細(xì)胞MMP-9的活性比對(duì)照組增強(qiáng)(P＜0.05)，呈濃度依賴性，10ng/mL IL-17組MMP-2活性無(wú)明顯變化(P＞

5、0.05)，50、100ng/mLIL-17組MMP-2活性增強(qiáng)(P＜0.05);三維培養(yǎng)結(jié)果顯示，不同濃度IL-17處理的B16細(xì)胞體外VM形成能力與對(duì)照組相比無(wú)明顯變化（P＞0.05）。
　　 3.Western-blot檢測(cè)結(jié)果顯示B16細(xì)胞高表達(dá)IL-17R，免疫熒光染色顯示B16細(xì)胞中可見(jiàn)IL-17R的陽(yáng)性表達(dá)，IL-17R主要定位表達(dá)于胞膜和胞漿。
　　 結(jié)論：
　　 1.IL-17可以誘導(dǎo)B16細(xì)胞