腫瘤細(xì)胞中鐵輸出蛋白ferroportin異常調(diào)控的機(jī)制研究.pdf

1、分類(lèi)號(hào)：R 7 3 7 ．2 5密 級(jí)：學(xué)位類(lèi)別： 科學(xué)學(xué)位團(tuán) 專(zhuān)業(yè)學(xué)位口學(xué)校代碼：學(xué) 號(hào)：學(xué)科門(mén)類(lèi)：l0O622 0 1 0 6 0 1 1 0 6醫(yī)學(xué)夭蚌魯科袁垮 警I 矗N J I N 黼￡D I e A | - U 瓣l V E R S l W博士學(xué)位論文D o C T o R A L D I S S E R T A T I o N論文題目：腫瘤細(xì)胞中鐵輸出蛋白f e r r o p o r t i n 異常調(diào)控的機(jī)制研究T I

2、T L E ：T h e m o l e c u l a r m e c h a n i s mu n d e r l y i n g d e r e g u l a t i o no fi r o ne x p o r t e r f e r r o p o r t i ni nt u m o r s一級(jí)學(xué)科：臨床醫(yī)學(xué)二級(jí)學(xué)科：外科學(xué)泌尿外論文作者：陳岳指導(dǎo)教師：徐勇教授導(dǎo)師組成員：劉思金研究員張志宏教授天津醫(yī)科大學(xué)研究生院二。一三年

3、五月天津醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文中文摘要目的探討f e r r o p o r t i n 異常表達(dá)在前列腺癌和乳腺癌細(xì)胞增殖中的作用，并進(jìn)一步明確其調(diào)節(jié)的分子機(jī)制。方法通過(guò)q R T - P C R 和W e s t e mb l o t 檢測(cè)f e r r o p o r t i n 在乳腺癌組織中的m R N A 和蛋白表達(dá)水平，構(gòu)建f e r r o p o r t i n 高表達(dá)質(zhì)粒，應(yīng)用f e r r o p o r t i n

4、 高表達(dá)質(zhì)粒和f e r r o p o r t i n 特異性s h R N A 轉(zhuǎn)染前列腺癌P C 3 細(xì)胞和乳腺癌M D A ．M B ．2 3 1 細(xì)胞，建立f e r r o p o r t i n 穩(wěn)定高、低表達(dá)的腫瘤細(xì)胞系，運(yùn)用細(xì)胞計(jì)數(shù)、M T T 和B r d U 等方法檢測(cè)f e r r o p o r t i n 異常表達(dá)對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖的影響，克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)其對(duì)腫瘤形成能力的作用，并通過(guò)構(gòu)建腫瘤動(dòng)物模型對(duì)體外實(shí)驗(yàn)結(jié)

5、果進(jìn)行驗(yàn)證；為了探討f e r r o p o r t i n 異常表達(dá)的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)機(jī)制，我們通過(guò)文獻(xiàn)檢索、網(wǎng)絡(luò)軟件和基因芯片等手段，對(duì)f e r r o p o r t i n 啟動(dòng)子3 ．0k b 區(qū)域進(jìn)行預(yù)測(cè)并選定N r f 2 和M Z F 一1 作為研究對(duì)象，應(yīng)用染色質(zhì)免疫共沉淀技術(shù)檢測(cè)N r f 2 、M Z F 一1 與f e r r o p o r t i n 啟動(dòng)子的相互作用，然后構(gòu)建含有或不含N r f 2 、M Z

6、F ．1 結(jié)合位點(diǎn)的l u c i f e r a s e 報(bào)告基因質(zhì)粒，通過(guò)l u c i f e r a s e 報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)分析不同結(jié)合位點(diǎn)在轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)f e r r o p o r t i n表達(dá)中的作用，并運(yùn)用組織篩查和特異性s i R N A 沉默技術(shù)，對(duì)結(jié)果進(jìn)一步驗(yàn)證；我們應(yīng)用M Z F ．1 高表達(dá)質(zhì)粒和M Z F ．1 特異性s i R N A 轉(zhuǎn)染P C 3 細(xì)胞，通過(guò)細(xì)胞計(jì)數(shù)、M T T 、B r d U 和細(xì)胞活力

7、檢測(cè)等方法檢測(cè)M Z F ．1 異常表達(dá)對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖的影響，然后利用網(wǎng)絡(luò)工具分別對(duì)M Z F ．13 ’U T R 區(qū)域和啟動(dòng)子3 ．0 k b 區(qū)域進(jìn)行預(yù)測(cè)，尋找可能的m i R N A s 和轉(zhuǎn)錄因子； m i R - 4 9 2m i m i c 轉(zhuǎn)染P C 3 細(xì)胞后，細(xì)胞計(jì)數(shù)、M T T 和B r d U 檢測(cè)細(xì)胞增殖能力，W e s t e m b l o t 檢測(cè)M Z F ．1 蛋白表達(dá)水平，構(gòu)建M Z F —l 3

8、’U T R 的l u c i f e r a s e 報(bào)告基因質(zhì)粒，通過(guò)l u c i f e r a s e 報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)分析m i R - 4 9 2 對(duì)M Z F 一1 的調(diào)節(jié)；我們利用A P 4 、c ．M y b 特異性s i R N A 技術(shù)，通過(guò)q R T - P C R 和W e s t e r n b l o t 檢測(cè)M Z F ．1 的m R N A 和蛋白表達(dá)水平，然后應(yīng)用染色質(zhì)免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)明確A P 4 、c