HBV重組桿狀病毒HepG2系統(tǒng)的建立及初步應(yīng)用.pdf_第1頁(yè)
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1、本研究旨在采用Bac-to-Bac重組桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)將復(fù)制型HBV基因組轉(zhuǎn)入HepG2細(xì)胞，建立HBV中國(guó)株及其有關(guān)變異株的重組桿狀病毒HepG2細(xì)胞系統(tǒng)，并應(yīng)用該系統(tǒng)初步評(píng)價(jià)抗病毒藥物拉米夫定對(duì)HBV表達(dá)及復(fù)制的影響。材料和方法：將1.2倍HBV基因組(血清adr型、基因C型)連接至桿狀病毒的轉(zhuǎn)移載體pFastBacI上，然后轉(zhuǎn)化入DH10Bac菌株中，在細(xì)菌內(nèi)的Helper質(zhì)粒輔助作用下與桿狀病毒基因組Bacmid發(fā)生位點(diǎn)特異性轉(zhuǎn)

2、座，形成含有HBV基因組的重組Bacmid，轉(zhuǎn)染sf9細(xì)胞后，包裝產(chǎn)生HBV重組桿狀病毒vAcHBVc。采用連續(xù)PCR引入方法進(jìn)行定點(diǎn)突變，構(gòu)建YVDD變異株質(zhì)粒，并按照上述方法構(gòu)建HBV YVDD異株重組桿狀病毒vAcHBVcYVDD。同時(shí)，為便于觀察轉(zhuǎn)染效率及病毒滴度測(cè)定，將HBV基因組重組入帶有綠色熒光蛋白(eGFP)基因的轉(zhuǎn)移載體pFastBacDualeGFP，從而構(gòu)建得到可在昆蟲(chóng)細(xì)胞中表達(dá)綠色熒光蛋白的HBV重組桿狀病毒vA

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