Sonazoid超聲造影診斷肝纖維化-硬化的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、本文對(duì)Sonazoid超聲造影診斷肝纖維化/硬化進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)研究。本文分為兩個(gè)部分：
　　 第一部分：大鼠Kupffer細(xì)胞培養(yǎng)系內(nèi)超聲輻照下Sonazoid微泡的動(dòng)態(tài)現(xiàn)象。
　　 目的：驗(yàn)證Kupffer細(xì)胞對(duì)Sonazoid微泡的吞噬，探討超聲輻照的條件對(duì)微泡運(yùn)動(dòng)和形態(tài)的影響作用以及對(duì)細(xì)胞的安全性。
　　 方法：鏈霉蛋白酶和膠原酶法分離大鼠Kupffer細(xì)胞并體外培養(yǎng)。倒置相差顯微鏡下觀察細(xì)胞對(duì)Sonazoid

2、微泡的吞噬。用臨床超聲檢查儀，觀測(cè)在不同聲壓和幀頻條件的超聲輻照下Sonazoid微泡在Kupffer細(xì)胞系內(nèi)的動(dòng)態(tài)現(xiàn)象。用水聽(tīng)器測(cè)量產(chǎn)生微泡各種現(xiàn)象的聲壓及其閾值。檢測(cè)因輻照微泡破裂對(duì)細(xì)胞的損傷。
　　 結(jié)果：分離Kupffer細(xì)胞活性大于90％，細(xì)胞純度95％以上。鏡下可見(jiàn)Kupffer培養(yǎng)細(xì)胞對(duì)Sonazoid微泡的吞噬，吞噬率91％。微泡與細(xì)胞的關(guān)系呈現(xiàn)游離、黏附和被吞噬三種狀態(tài)。在頻率3.5MHz、幀頻15Hz的超聲輻

3、照下，游離微泡在超聲機(jī)械指數(shù)(Mechnical Index，MI)0.21時(shí)由靜止出現(xiàn)震動(dòng)，產(chǎn)生震動(dòng)現(xiàn)象的最佳聲壓范圍為MI=0.21-0.44；MI=0.53時(shí)微泡的移動(dòng)現(xiàn)象最明顯；MI=0.75時(shí)絕大多數(shù)微泡出現(xiàn)壓縮現(xiàn)象；導(dǎo)致微泡破裂的聲壓閾值是MI=1.03。黏附微泡在MI=0.53時(shí)從細(xì)胞表面脫離，MI=1.03時(shí)微泡的壓縮現(xiàn)象達(dá)到峰值，MI=1.18是微泡破裂的聲壓閾值。被吞噬微泡在MI=1.18時(shí)出現(xiàn)壓縮現(xiàn)象，發(fā)生破裂的閡

4、值為MI=1.37。在輻照頻率相同、幀頻1Hz的條件下，需要采用更高的聲壓使微泡發(fā)生上述現(xiàn)象。黏附微泡和吞噬微泡在高聲壓下破裂后未發(fā)現(xiàn)相關(guān)的細(xì)胞損傷。超聲儀器所顯示的機(jī)械指數(shù)與水聽(tīng)器測(cè)得的實(shí)際聲壓呈線(xiàn)性相關(guān)。
　　 結(jié)論：Kupffer細(xì)胞對(duì)Sonazoid微泡存在高度吞噬現(xiàn)象。超聲輻照的條件(聲壓、幀頻)對(duì)微泡的運(yùn)動(dòng)(靜止、震動(dòng)和移動(dòng))和微泡的形態(tài)(壓縮、破裂)有明顯的影響作用，但未見(jiàn)并發(fā)細(xì)胞損傷。
　　 第二部分：S

5、onazoid超聲造影診斷肝纖維化/硬化的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)。
　　 目的：探討活體Sonazoid超聲造影(Contrast-enhanced Ultrasound，CEUS)診斷肝纖維化/硬化的可行性和建立相應(yīng)的方法。
　　 方法：口服四氯化碳法制作大鼠肝纖維化/硬化模型。對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物行常規(guī)超聲檢查后，經(jīng)周?chē)o脈先后注射超聲造影劑SonoVue和Sonazoid行CEUS檢查。分析常規(guī)超聲圖像和Sonazoid-CEUS Kup

6、ffer期增強(qiáng)圖像并行診斷性試驗(yàn)。采用高級(jí)動(dòng)態(tài)血流成像(ADF成像)觀察Sonazoid-CEUSKupffer期增強(qiáng)表現(xiàn)。采用Imagelab軟件定量測(cè)量Sonazoid-CEUSKupffer期增強(qiáng)水平及描繪時(shí)間強(qiáng)度曲線(xiàn)，并行診斷性試驗(yàn)。
　　 結(jié)果：肝纖維化/硬化模型制作成功率100％，死亡率12.5％。24只大鼠進(jìn)入超聲檢查，按病理診斷分為正常肝臟組(n=5)、肝纖維化組(n=6)和肝硬化組(n=13)。常規(guī)超聲檢查根據(jù)

7、肝臟形態(tài)改變和脾大、腹水等表現(xiàn)，診斷肝纖維化/硬化的敏感性63.2％(12/19)，特異性100％(5/5)，陽(yáng)性預(yù)測(cè)值100％(12/12)，陰性預(yù)測(cè)值41.7％(5/12)，準(zhǔn)確率70.8％(17/24)。兩種造影劑的CEUS動(dòng)脈期和門(mén)脈期表現(xiàn)基本一致。注射造影劑5分鐘后SonoVue-CEUS上的增強(qiáng)顯像基本消失，Sonazoid-CEUS繼續(xù)顯影進(jìn)入Kupffer期，從此期開(kāi)始至注射造影劑后10分鐘時(shí)，增強(qiáng)圖像表現(xiàn)為：肝臟增強(qiáng)水

8、平正常肝臟組高于肝纖維化組和肝硬化組，肝臟與脾臟增強(qiáng)水平的差異正常肝臟組小于肝纖維化組和肝硬化組。這種增強(qiáng)特征得到ADF成像的佐證。根據(jù)Sonazoid-CEUS Kupffer期肝實(shí)質(zhì)增強(qiáng)水平的高低和肝臟與脾臟增強(qiáng)水平差異的大小診斷肝纖維化/硬化的敏感性84.2％(16/19)，特異性100％(5/5)，陽(yáng)性預(yù)測(cè)值100％(16/16)，陰性預(yù)測(cè)值62.5％(5/8)，準(zhǔn)確率87.5％(21/24)，顯著優(yōu)于常規(guī)超聲診斷(P=0.01

9、7)。定量測(cè)量進(jìn)一步顯示，10分鐘時(shí)肝實(shí)質(zhì)增強(qiáng)水平以正常肝臟組最高，肝纖維化組次之，肝硬化組最低，三組間差異顯著(P=0.045，P=0.002，P=0.035)；肝脾增強(qiáng)水平的差異以正常肝臟組最小，肝纖維化組居中，肝硬化組最大，后者與前兩組之間有顯著性差異(P=0.009，P=0.016)。以Kupffer期肝實(shí)質(zhì)增強(qiáng)水平≥-40dB或肝脾差異≤3dB診斷為正常肝臟、-42dB≤肝臟增強(qiáng)水平＜-40dB或3dB＜肝脾差異≤5dB診斷為

10、肝纖維化和肝臟實(shí)質(zhì)增強(qiáng)水平＜-42dB或肝脾差異＞5dB診斷為肝硬化，對(duì)正常肝，肝纖維化和肝硬化診斷的敏感性分別為100％(5/5)，100％(6/6)和84.6％(11/13)；特異性73.7％(14/19)，72.2％(13/18)和63.6％(7/11)；陽(yáng)性預(yù)測(cè)值50％(5/10)，54.5％(6/11)和73.7％(11/15)；陰性預(yù)測(cè)值100％(14/14)，100％(13/13)和77.8％(7/9)；準(zhǔn)確率79.2％(