超聲造影診斷肝動(dòng)脈狹窄的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的與意義: 肝動(dòng)脈狹窄是肝移植術(shù)后的常見并發(fā)癥，臨床發(fā)生率較高，是導(dǎo)致移植失敗乃至受體死亡的主要原因之一，肝動(dòng)脈的通暢性對于移植術(shù)后膽道系統(tǒng)的血供也具有重要意義，因此對移植術(shù)后肝動(dòng)脈并發(fā)癥的監(jiān)測極為關(guān)鍵。X線血管造影是目前診斷肝動(dòng)脈狹窄的金標(biāo)準(zhǔn)，但術(shù)后并發(fā)癥多、造影劑腎毒性大以及費(fèi)用昂貴等因素限制了其在臨床的廣泛應(yīng)用。其他評價(jià)方法如：CT、MRI成像、放射性核素掃描等也存在著儀器要求高、不能床邊、不便重復(fù)以及放射示蹤劑缺乏穩(wěn)定

2、性和具有放射污染等無法克服的缺點(diǎn)。彩色多普勒超聲以其簡便、無創(chuàng)、可床邊重復(fù)檢查等優(yōu)點(diǎn)，成為檢測肝移植術(shù)后肝動(dòng)脈狹窄的首選影像學(xué)方法，但與超聲造影相比，易受彩色外溢、運(yùn)動(dòng)噪音干擾等多種因素的影響準(zhǔn)確性相對較低。超聲造影是一門用于評價(jià)實(shí)質(zhì)性臟器血流灌注的新興技術(shù)，它應(yīng)用微氣泡作為示蹤劑，在超聲條件下觀察組織的血流灌注情況，另外，超聲造影及相關(guān)造影顯像技術(shù)的發(fā)展，集合了所有無創(chuàng)性影像診斷的功能，使組織顯像達(dá)到了微小血管血流灌注的水平，避免了C

3、DFI內(nèi)在的不足，可較準(zhǔn)確的顯示移植術(shù)后肝動(dòng)脈狹窄并判斷其狹窄程度，有利于提高肝移植術(shù)后肝動(dòng)脈并發(fā)癥診斷的準(zhǔn)確性。本研究聯(lián)合應(yīng)用新近發(fā)展起來的聲學(xué)密度定量技術(shù)，探討超聲造影定量分析技術(shù)診斷肝動(dòng)脈狹窄的可行性，以尋找更簡便、準(zhǔn)確、安全而又無創(chuàng)的診斷方法，為移植后肝動(dòng)脈狹窄的診斷奠定基礎(chǔ)。 資料與方法: 1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 健康雜種犬10只，雌雄不限，體重15-20kg(南方醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供)。 2.儀器設(shè)備

4、 超聲造影儀器選用Philipsiu22彩超儀，內(nèi)置聲學(xué)密度分析軟件QLAB，探頭型號C5-2(頻率2.0～5.0MHz)及L9-3(頻率3.0～9.0MHz)，選用脈沖反向諧波造影技術(shù)。儀器其它設(shè)置(增益、掃描深度等)在造影前后保持不變，所有實(shí)驗(yàn)應(yīng)用相同設(shè)置。 X線血管造影儀器選用SIEMENSAXIOM1conosR200FL-Ccm。 3.造影劑 采用南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院藥理基地提供的白蛋白包裹全氟丙

5、烷微氣泡聲學(xué)造影劑“全氟顯”，微泡直徑2.0～5.0μm，濃度1.0×109～2.0×109／ml，分布90％<10.0μm，pH值6.4～7.4。 4.實(shí)驗(yàn)方法 4.1手術(shù)室準(zhǔn)備：每只實(shí)驗(yàn)犬用3％鹽酸戊巴比妥按30mg／kg行靜脈麻醉后常規(guī)胸腹部備皮，實(shí)驗(yàn)過程中以3％鹽酸戊巴比妥靜注維持麻醉狀態(tài)；分離左側(cè)股靜脈，建立靜脈通道，接三通管用于輸注造影劑、液體和藥物，并以生理鹽水維持體液平衡。分離右側(cè)股動(dòng)脈用于X線血管造影插

6、管；取腹部正中切口暴露肝臟及肝動(dòng)脈，并游離肝動(dòng)脈根部。 4.2肝動(dòng)脈狹窄模型制備：手術(shù)絲線繞過犬肝動(dòng)脈主干，其兩端穿入自制硅膠管，出口處使用血管鉗將其夾住，通過拉緊絲線壓迫血管壁的方法建立肝動(dòng)脈狹窄模型，并通過收放血管鉗的力度來調(diào)解肝動(dòng)脈的狹窄程度，具體數(shù)值經(jīng)游標(biāo)卡尺測量肝動(dòng)脈外徑同時(shí)使用二維超聲測量其橫截面積的方法計(jì)算得出，實(shí)驗(yàn)中每條犬均依次按照正常，50％，70％，90％，100％的狹窄程度順序進(jìn)行。 4.3X線血管

7、造影：在X線透視引導(dǎo)下，將介入導(dǎo)管由股動(dòng)脈插入，經(jīng)腹主動(dòng)脈送至肝動(dòng)脈主干，注入20％泛影葡胺5ml，同時(shí)開啟X線血管造影儀證實(shí)狹窄程度。 4.4CDFI檢查：觀察犬肝動(dòng)脈有無血流顯示，并檢測其血流峰值(Vp)、加速度時(shí)間(SAT)和阻力指數(shù)(RI)。 4.5超聲造影檢查：由股靜脈彈丸式注入造影劑(0.025～0.03ml／kg，約0.4ml)，以3ml生理鹽水進(jìn)行稀釋、搖勻，每次注入完畢用5ml生理鹽水沖洗管壁，分別觀察

8、肝動(dòng)脈、肝臟、腹主動(dòng)脈及左心室腔的血流灌注情況。重復(fù)注射時(shí)，間隔時(shí)間大于10min。全部聲學(xué)造影圖像存于CD盤，以備脫機(jī)分析。 5.圖像分析 檢查完成后啟動(dòng)聲學(xué)密度分析軟件QLAB，選擇適當(dāng)大小和形狀的感興趣區(qū)(ROI)，分別置于待分析肝實(shí)質(zhì)、腹主動(dòng)脈及左心室腔內(nèi)(ROI邊緣距包膜2mm以內(nèi))，注意避開較大的血管，ROI均取同樣大小和形狀，以便減少取樣誤差。由儀器自帶程序自動(dòng)繪制成TIC曲線圖，以獲取各個(gè)狹窄程度的肝實(shí)質(zhì)

9、、腹主動(dòng)脈及左心室腔的血流灌注的下列參數(shù)：PI，AUC，TTP和Alpha。 6.病理、生化檢查 所有動(dòng)物在實(shí)驗(yàn)結(jié)束后立即取小塊肝組織，以10％的福爾馬林固定，制成HE染色切片進(jìn)行病理檢查，抽靜脈血5ml進(jìn)行生化檢查。之后將實(shí)驗(yàn)犬肝動(dòng)脈結(jié)扎并處理創(chuàng)面，縫合切口，送實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心喂養(yǎng)24小時(shí)后推注空氣處死，取出肝臟，切取小塊肝組織再進(jìn)行病理檢查以及生化檢查，并對兩組結(jié)果分別進(jìn)行比較。 7.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 所有數(shù)據(jù)

10、用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，使用spss13.0統(tǒng)計(jì)軟件，均數(shù)間的比較用方差分析，兩兩比較用LSD法，相關(guān)關(guān)系用spearman相關(guān)分析。P≤0.05(雙側(cè))為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果: 在對50例次犬肝動(dòng)脈(其中正常10次，各個(gè)狹窄程度共40次)進(jìn)行超聲造影檢查后發(fā)現(xiàn)，超聲造影能清晰顯示肝動(dòng)脈的走行并39次發(fā)現(xiàn)狹窄肝動(dòng)脈，其表現(xiàn)為不同程度的造影劑局部充盈缺損，且顯示部位及程度與X線血管造影相吻合，檢查結(jié)果顯示僅漏診一例，其檢

11、查的敏感性、特異性和陽性預(yù)測值分別為100％、91％和98％，經(jīng)檢驗(yàn)在特異性和陽性預(yù)測值方面優(yōu)于彩色多普勒。 應(yīng)用QLAB超聲造影定量分析軟件，超聲造影圖像顯示實(shí)驗(yàn)犬肝動(dòng)脈基礎(chǔ)狀態(tài)下造影后肝實(shí)質(zhì)回聲明顯增強(qiáng)，其TIC曲線上升陡直，迅速達(dá)到峰值強(qiáng)度，而后緩慢下降至基礎(chǔ)水平。肝動(dòng)脈狹窄程度為50％、70％和90％情況下肝實(shí)質(zhì)均呈增強(qiáng)顯像，但均較肝動(dòng)脈基礎(chǔ)狀態(tài)下增強(qiáng)程度減低，且增強(qiáng)程度隨狹窄程度加重而減弱，其TIC曲線上升速度減慢，峰

12、值減低。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析結(jié)果顯示：與基礎(chǔ)狀態(tài)相比，肝動(dòng)脈四種狹窄程度均使肝組織PI及PI比值減小(P<0.001)，并隨著狹窄程度的增加而逐漸減小(P<0.05)，且肝實(shí)質(zhì)PI值與肝動(dòng)脈狹窄程度之間存在良好的相關(guān)關(guān)系(r=0.906,P<0.001)，而肝動(dòng)脈四種狹窄程度下的AUC，TTP和Alpha與基礎(chǔ)狀態(tài)相比差別不具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)論: 超聲造影是一門用于評價(jià)實(shí)質(zhì)性臟器血流灌注的新興技術(shù)，它應(yīng)用微氣泡作為示蹤劑，在超聲條

13、件下觀察組織的血流灌注情況。與之匹配的脈沖反向諧波聲學(xué)造影技術(shù)允許使用更寬的帶寬，在提高分辨率地同時(shí)增加了造影劑地靈敏性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：二者的結(jié)合避免了CDFI內(nèi)在的不足，可通過直接觀察肝動(dòng)脈內(nèi)微氣泡流動(dòng)所形成的帶狀二維灰階增強(qiáng)效果及狹窄時(shí)產(chǎn)生的局部充盈缺損較準(zhǔn)確地顯示移植術(shù)后肝動(dòng)脈狹窄并判斷其狹窄程度，有利于提高肝移植術(shù)后肝動(dòng)脈并發(fā)癥診斷的準(zhǔn)確性，且檢查結(jié)果與X線血管造影結(jié)果基本相符。 本實(shí)驗(yàn)還采用QLAB定量分析技術(shù)，即將感