造血調(diào)節(jié)因子M-CSF和EDAG的克隆及性質(zhì)研究.pdf

1、造血生長因子和轉(zhuǎn)錄因子對造血細胞的分化和發(fā)育起著決定性作用.該文選擇了巨噬細胞集落刺激因子(M-CSF)和新發(fā)現(xiàn)的造血相關(guān)基因(EDAG)作為研究造血調(diào)控分子機制的入門.J6-1細胞系是該室建立的人白血病細胞系,呈現(xiàn)霍奇金病(HD)細胞系的性質(zhì),也表現(xiàn)出明顯的異質(zhì)性.從J6-1細胞分離到膜結(jié)合因子(MAF-J6-1)和它的受體(MAF-J6-1-R).該實驗室多年業(yè)的研究證明MAF-J6-1很可能是膜結(jié)合型的M-CSF,但尚未克隆其編碼

2、基因,缺乏直接證據(jù).該研究擬克隆MAF-J6-1及其受體的編碼基因并進行序列測定,從分子水平證實MAF-J6-1是否就是膜結(jié)合型的M-CSF.該實驗采用RT-PCR方法從J6-1細胞克隆出M-CSF及其受體基因的編碼區(qū),結(jié)果表明J6-1細胞中存在著m-M-CSF和s-M-CSF兩種mRNA轉(zhuǎn)錄本.該實驗采用半定量RT-PCR技術(shù)對人白血病細胞系、正常人骨髓、培養(yǎng)的人胚肺細胞及臍血CD34<'+>細胞中EDAG mRNA的表達水平進行了檢

3、測.結(jié)果顯示,EDAG基因在K562、KG-1a、Jurket、Namava細胞系及臍血CD34<'+>細胞中有較高的表達,在Raji、LCL、SMMC-7721細胞和正常人骨髓單個核細胞中次之,在U937細胞中表達較弱,而HL-60、NB4、J6-1細胞系和培養(yǎng)的人胚肺細胞均沒有測出EDAG mRNA的表達.RNA干擾(RNAi)是利用具有同源性的雙鏈RNA誘發(fā)序列特異的轉(zhuǎn)錄后基因沉默的現(xiàn)象,具有高效性和特異性,已成為基因功能研究的一