細(xì)胞因子M-CSF和核轉(zhuǎn)錄因子促進(jìn)Fral-1對巨噬細(xì)胞向M2d型的轉(zhuǎn)化作用.pdf

1、目的：探究AP-1(Activator protein-1)家族成員分子c-Jun和c-Fos是否在M1型巨噬細(xì)胞向M2d型巨噬細(xì)胞轉(zhuǎn)化中發(fā)揮作用，胞外刺激因子M-CSF是否在這一轉(zhuǎn)化過程中發(fā)揮作用，核因子NF-κB是否與AP-1協(xié)同促進(jìn)了這一轉(zhuǎn)化。
　　 方法：RAW264.7巨噬細(xì)胞與小鼠乳腺癌細(xì)胞(4T1)共同培養(yǎng)模擬重構(gòu)腫瘤微環(huán)境，應(yīng)用實(shí)時熒光定量的手段檢測RAW264.7中c-Fos、c-Jun、NF-κB相關(guān)分子mR

2、NA的水平，同時應(yīng)用免疫細(xì)胞化學(xué)和WB的手段檢測胞內(nèi)c-Fos和c-Jun蛋白水平。應(yīng)用ELISA技術(shù)檢測單獨(dú)培養(yǎng)組和共培養(yǎng)組上清中M-CSF(Macrophage-colony-stimulating factor)的含量；檢測巨噬細(xì)胞對其敏感度，進(jìn)而分別使用M-CSF(30ng/ml)和中和抗體與RAW264.7共培養(yǎng)，在基因和蛋白水平檢測AP-1家族和NF-κB家族對M-CSF的敏感性。
　　 結(jié)果：RAW264.7細(xì)胞與

3、4T1細(xì)胞或其上清共培養(yǎng)后，RAW264.7無論從基因還是蛋白水平，Ap-1家族c-Jun都顯著性表達(dá)增加，c-Fos的表達(dá)變化并不明顯；共培養(yǎng)后上清液中M-CSF的消耗較之單獨(dú)培養(yǎng)RAW加??；加入M-CSF刺激后，c-Jun mRNA激增，而在加入中和抗體后，c-Jun表達(dá)明顯下調(diào)，同時NF-κB家族p65呈現(xiàn)與c-Jun相似的變化趨勢；WB結(jié)果顯示核內(nèi)p-Jun蛋白水平激增，加入中和抗體后，水平降低。
　　 結(jié)論：轉(zhuǎn)錄因子c