JNK-MCP-1-ERK-CREB信號通路介導(dǎo)姜黃素緩解Ⅱ型糖尿病神經(jīng)痛大鼠的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:觀察姜黃素、JNK抑制劑、姜黃素復(fù)合MCP-1對Ⅱ型糖尿病神經(jīng)病理性疼痛模型（DNP）大鼠機(jī)械痛敏(MWT)、熱痛敏(TWL)和脊髓背角、背根神經(jīng)節(jié)(DRG)中p-ERK和p-CREB表達(dá)的影響，探討姜黃素治療神經(jīng)病理性疼痛的相關(guān)機(jī)制。
　　 方法:高脂高糖飼料喂養(yǎng)SD大鼠8周誘導(dǎo)胰島素抵抗后，繼以單次小劑量鏈脲佐菌素(STZ)35mg/kg腹腔注射，3d后血糖≥16.7mmol/l者入選為Ⅱ型糖尿病大鼠（M組）。在注射S

2、TZ前(pre-14)和14d后(T0)MWT、TWL低于基礎(chǔ)值85％以下的大鼠視為Ⅱ型糖尿病神經(jīng)病理性疼痛大鼠，將其隨機(jī)分為6組(n=27):Ⅱ型糖尿病神經(jīng)病理性痛組（DNP組）、DNP+姜黃素組（Cur組）、DNP+玉米油組（S組）、DNP+JNK抑制劑組（J組）、DNP+DMSO（JS組）、DNP+姜黃素+MCP-1組（CM組）。Cur組、SC組于分別腹腔注射姜黃素和玉米油100mg/kg(25 mg/ml)，J組和JS組分別鞘內(nèi)

3、注射JNK抑制劑5μg和DMSO10μl，DCM組腹腔注射姜黃素100 mg/kg后，鞘內(nèi)注射MCP-110 ng，1次/d，連續(xù)14天。DNP組不做任何處理。另取27只為正常對照組（C組），給予普通飼料喂養(yǎng)。給姜黃素3、7、14d后(T1、T2、T3)測血糖、MWT與TWL，并在同時(shí)間點(diǎn)取大鼠L4-6脊髓和背根神經(jīng)節(jié)(DRG)，用免疫組化和免疫印跡法測定脊髓背角和背根神經(jīng)節(jié)中p-ERK和p-CREB的表達(dá)。
　　 結(jié)果:

4、>　　 1.大鼠體重、血糖、胰島素濃度及胰島素敏感指數(shù)的變化:與C組相比，高糖高脂飼養(yǎng)8周后M組大鼠血糖水平明顯增高但未達(dá)到糖尿病診斷標(biāo)準(zhǔn)（C組3.6±0.4 mmol/L，M組5.4±1.3mmol/l）(P＜0.05)，空腹胰島素濃度也明顯升高（C組13.37±3.89 mIU/L，M組16.88±4.47 mIU/L）（P＜0.05），胰島素敏感指數(shù)明顯下降（C組-3.89±0.51，M組-4.51±1.59）(P＜0.05)。

5、
　　 2.藥物對MWT、TWL的影響:
　　 造模前各組MWT、TWL基礎(chǔ)值無差別（C組43.6±2.3、13.67±2.43;DNP組42.2±3.4、13.83±0.83;Cur組41.7±5.5、14.21±1.32;SC組41.4±3.3、12.91±1.44）。與C組相比，造模后DNP組、Cur組、S組、J組、JS組和CM組MWT降低、TWL縮短(P＜0.05);與DNP組相比，Cur組和J組在T2、T3時(shí)間

6、點(diǎn)MWT明顯升高、TWL明顯延長(P＜0.05);CM組在T1、T2、T3時(shí)間點(diǎn)MWT降低、TWL縮短(P＜0.05);S組、JS組和DNP組相比，給藥后各時(shí)間點(diǎn)MWT、TWL差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 3.脊髓背角及DRG p-ERK、p-CREB蛋白表達(dá)的變化:
　　 本實(shí)驗(yàn)中，C組大鼠脊髓背角和DRG p-ERK、p-CREB蛋白僅有少量表達(dá)。造模后，與C組相比，DNP組、Cur組、S組、J組、JS組、CM組脊髓背角

7、及DRG p-ERK、p-CREB蛋白表達(dá)明顯增多(P＜0.05)。在T2時(shí)間點(diǎn)，Cur組脊髓和DRG、DJ組DRG中p-ERK、p-CREB蛋白表達(dá)均低于DNP組(P＜0.05)。在T3時(shí)間點(diǎn)、Cur組和J組脊髓和DRG中p-ERK、p-CREB蛋白表達(dá)均低于DNP組(P＜0.05)。S組、JS組、CM組與DNP組p-ERK、p-CREB蛋白表達(dá)基本一致，無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　 4.脊髓背角及DRG p-ERK、p-CREB陽性

8、細(xì)胞表達(dá)的變化:
　　 C組大鼠脊髓背角淺層及DRG僅有少量p-ERK、p-CREB陽性細(xì)胞表達(dá)。造模后，DNP組、Cur組、S組、J組、JS組和CM組大鼠脊髓背角和DRG的p-ERK、p-CREB陽性細(xì)胞表達(dá)顯著多于C組(P＜0.05)。在T3時(shí)間點(diǎn)，Cur組和J組大鼠脊髓背角和DRG p-ERK、p-CREB陽性細(xì)胞表達(dá)表達(dá)均低于DNP組(P＜0.05)。S組、JS組、CM組p-ERK、p-CREB陽性細(xì)胞表達(dá)與DNP組基本