IETM在動(dòng)脈粥樣硬化及心臟病發(fā)生發(fā)展中的作用及機(jī)制探討.pdf

1、第一部分:
　　 高糖高脂飲食誘導(dǎo)IETM在代謝綜合征相關(guān)AS發(fā)生發(fā)展中的作用及機(jī)制探討
　　 目的:
　　 探討高糖高脂飲食誘發(fā)腸源性內(nèi)毒素血癥(IETM)在代謝綜合征相關(guān)的AS發(fā)生、發(fā)展中的作用及機(jī)制。研究血漿中持續(xù)高表達(dá)的LPS觸發(fā)代謝綜合征相關(guān)的AS發(fā)生、發(fā)展的作用機(jī)制，為防治代謝綜合征相關(guān)的AS尋求新思路及新途徑。
　　 方法:
　　 1、64只SD大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組(normalgro

2、up;NC)和模型組(modelgroup;MG)，每組各32只;每組再隨機(jī)分3月、6月、9月、12月4個(gè)時(shí)段進(jìn)行觀察，每時(shí)段8只。對(duì)照組喂飼基礎(chǔ)飼料，模型組喂飼高糖高脂飼料。
　　 2、放免法及酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)測(cè)定大鼠外周血內(nèi)毒素(LPS)、腫瘤壞死因子(TNFα)、C反應(yīng)蛋白(CRP)、巨噬細(xì)胞趨化蛋白-1(MCP-1)及一氧化氮(NO)、內(nèi)皮素-1(ET-1)、PAI-1的水平。
　　 3、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)測(cè)定外周

3、血丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、游離脂肪酸(FFA)、甘油三酯(TG)、總膽固醇(Tch)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)、血糖(FPG)、空腹胰島素(FINS)的水平，并計(jì)算胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR)。
　　 4、摘取主動(dòng)脈及肝左葉，病理組織學(xué)觀察主動(dòng)脈壁粥樣斑塊的形成及肝臟組織炎癥、脂變、纖維化病變。
　　 5、免疫組化法檢測(cè)CD68陽(yáng)性的單核/巨噬細(xì)胞在動(dòng)脈壁的浸潤(rùn)情況;檢測(cè)動(dòng)脈壁iNOS和NF

4、-κB的表達(dá);檢測(cè)Tunnel在動(dòng)脈壁的表達(dá)分析細(xì)胞凋亡情況。
　　 6、蘇丹IV(SudanIV)特殊染色法觀察動(dòng)脈壁及肝細(xì)胞的脂質(zhì)異位沉積。
　　 結(jié)果:
　　 1、模型組各時(shí)段大鼠外周血LPS及炎癥相關(guān)因子TNF-a、CRP、MCP-1的表達(dá)水平明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);血管活性因子ET-1、PAI-1的表達(dá)水平明顯高于對(duì)照組，而NO的表達(dá)水平低于對(duì)照組，差異有顯著性(P＜0.05)

5、。
　　 2、模型組各時(shí)段大鼠外周血中ALT、FFA、TG、Tch、LDL的表達(dá)水平明顯高于對(duì)照組，而HDL的水平明顯低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);模型組FPG、FINS的表達(dá)水平明顯高于對(duì)照組，胰島素抵抗指數(shù)HOMA-IR的數(shù)值顯著高于對(duì)照組，差異有顯著性(P＜0.05)。
　　 3、主動(dòng)脈病理組織學(xué):對(duì)照組各時(shí)段主動(dòng)脈壁未見(jiàn)明顯異常病變;模型組第3月主動(dòng)脈內(nèi)皮增生;6月內(nèi)皮增生進(jìn)一步加重，內(nèi)膜明顯增厚

6、，內(nèi)皮下脂質(zhì)呈條帶狀沉積;中膜平滑肌細(xì)胞增生及彈力纖維紊亂;內(nèi)膜/中膜比值增大;9月組動(dòng)脈壁內(nèi)膜進(jìn)一步增厚，脂質(zhì)沉積進(jìn)一步增多，而中膜開(kāi)始出現(xiàn)萎縮，內(nèi)膜/中膜比值進(jìn)一步增大;粥樣斑塊形成，其內(nèi)出現(xiàn)了小灶鈣化;12月組內(nèi)膜／中膜比值保持高水平，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，顯示動(dòng)脈壁鈣化明顯加重。
　　 4、主動(dòng)脈單核/巨噬細(xì)胞的浸潤(rùn):對(duì)照組動(dòng)脈壁未見(jiàn)明顯單核/巨噬細(xì)胞粘附及浸潤(rùn);模型組第3月主動(dòng)脈內(nèi)皮表面粘附個(gè)別單核/巨噬細(xì)

7、胞，6月組內(nèi)皮下可見(jiàn)單核/巨噬細(xì)胞浸潤(rùn);9月及12月單核/巨噬細(xì)胞在內(nèi)皮下浸潤(rùn)進(jìn)一步增多，且主要集中在粥樣斑塊中，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 5、主動(dòng)脈iNOS的表達(dá):對(duì)照組動(dòng)脈壁內(nèi)皮細(xì)胞及平滑肌細(xì)胞iNOS散在少許細(xì)胞弱陽(yáng)性表達(dá)。模型組大鼠動(dòng)脈壁內(nèi)皮細(xì)胞及平滑肌細(xì)胞表達(dá)iNOS隨觀察時(shí)間的延長(zhǎng)陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞逐漸增多，強(qiáng)度逐漸增強(qiáng)，各時(shí)段間的表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 6、主動(dòng)脈NF-κB的

8、表達(dá):對(duì)照組動(dòng)脈壁內(nèi)皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞NF-κB的陽(yáng)性表達(dá)呈均勻一致的胞漿弱陽(yáng)性表達(dá)，核無(wú)陽(yáng)性表達(dá);模型組動(dòng)脈壁內(nèi)皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞出現(xiàn)了核陽(yáng)性表達(dá)，隨著觀察時(shí)間的延長(zhǎng)，核陽(yáng)性表達(dá)逐漸增多，胞漿陽(yáng)性變得不均勻，陽(yáng)性部位多聚集于核附近，模型組各時(shí)段核陽(yáng)性表達(dá)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。
　　 7、主動(dòng)脈Tunel的表達(dá):Tunel檢測(cè)顯示對(duì)照組動(dòng)脈壁內(nèi)皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞僅個(gè)別細(xì)胞核陽(yáng)性表達(dá);模型組3月組即可看到動(dòng)脈壁內(nèi)皮細(xì)胞和平

9、滑肌細(xì)胞明顯陽(yáng)性表達(dá);6月組核陽(yáng)性表達(dá)增多;9月組和12月組動(dòng)脈壁內(nèi)皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞呈彌漫核陽(yáng)性表達(dá)，差異有顯著性(P＜0.05)。
　　 8、肝臟的病理組織學(xué)觀察:對(duì)照組肝細(xì)胞未出現(xiàn)明顯病變，僅在匯管區(qū)見(jiàn)散在個(gè)別炎癥細(xì)胞浸潤(rùn);模型組從第3個(gè)月始大鼠先后發(fā)生了脂肪肝、脂肪性肝炎，第6個(gè)月出現(xiàn)纖維化，第12個(gè)月發(fā)展為早期肝硬化。
　　 結(jié)論:
　　 1、高糖高脂飲食誘導(dǎo)大鼠發(fā)生了IETM，血漿中LPS持續(xù)高表達(dá)。