系統(tǒng)性紅斑狼瘡活動期患者外周血B淋巴細胞中miRNA的異常表達.pdf

1、目的:了解在系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)活動期患者外周血B淋巴細胞中微小RNA(microRNA，miRNA，miR)是否存在異常表達，以期在SLE患者外周血B淋巴細胞中找出與狼瘡活動相關的miRNA，并觀察其表達與SLEDAI評分、血清免疫球蛋白及補體C3水平等的聯(lián)系，探討外周血B淋巴細胞中miRNA的表達是否參與系統(tǒng)性紅斑狼瘡的發(fā)病及活動。
　　 方法:選取46例SLE活動期患者作為研究對象（稱“活動期1組”），另選20名SLE

2、穩(wěn)定期患者和10名健康體檢者分別稱“穩(wěn)定期1組”和“正常對照組”，采集EDTA抗凝外周靜脈血5 mL，密度梯度離心分離法分離外周血單個核細胞，磁珠陰性分選法分離B淋巴細胞，流式細胞術驗證B淋巴細胞純度，根據(jù)TRIzol Regent的操作步驟提取RNA，將每組單個樣本RNA混成組總RNA，進行組間芯片分析，校正后的兩個樣品間雜交信號強度的比值＞2或＜0.5代表有明顯的表達差異，初步篩選SLE活動期患者在外周血B淋巴細胞異常表達的miRN

3、A。
　　 重新選取選取16例SLE活動期和16例SLE穩(wěn)定期患者為研究對象，分別稱“活動期2組”和“穩(wěn)定期2組”.同上方法分離出B淋巴細胞并提取單個樣本總RNA，利用stem-loop Real time-PCR技術對前期試驗篩選出的miRNA進行驗證。在SPSS17.0軟件上采用獨立樣本T檢驗(Independent-Samples T Test)對數(shù)據(jù)進行處理，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義，并分析驗證所得差異表達miRN

4、A與狼瘡活動指標（SLEDAI評分、血清補體C3及免疫球蛋白水平）的相關性。
　　 結果:芯片分析顯示，與穩(wěn)定期1組比較，共有70條miRNA在活動期1組患者外周血B淋巴細胞存在顯著性差異表達，有統(tǒng)計學意義。結合不同組間芯片信號強度的比值大小、已有的相關文獻報道及去除影響實驗結果因素等方面，從以上70條miRNA中挑出16條作為最終篩選結果。其中，異常低表達的包括miR-103、miR-26a、miR-191、miR-150、m

5、iR-17、miR-155、miR-92a、miR-181a、miR-221和miR-222，異常高表達包括miR-1249、miR-1224-3p、miR-2116-star-st、miR-4258、miR-1915和miR-220b。
　　 對這16條差異表達的miRNA經(jīng)stem-loop RT-PCR技術驗證顯示，與穩(wěn)定期2組比較，在活動期2組患者外周血B淋巴細胞中有5條miRNA(miR-191，miR-i03，miR

6、-17，miR-1224-3P，miR-1249)呈低表達;1條miRNA(miR-155)呈高表達， P值均＜0.05。
　　 數(shù)據(jù)經(jīng)雙變量相關處理顯示，活動期2組患者外周血B淋巴細胞中的miR-191和miR-155的表達分別與血清補體C3下降程度與呈正相關和負相關;未見活動期2組患者外周血B淋巴細胞中的miRNA表達與SLEDAI評分或與血清免疫球蛋白水平之間存在直線相關性。
　　 結論:SLE活動期患者外周血B淋