系統(tǒng)性紅斑狼瘡活動(dòng)期患者外周血B淋巴細(xì)胞中miRNA的異常表達(dá).pdf

1、目的:了解在系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)活動(dòng)期患者外周血B淋巴細(xì)胞中微小RNA(microRNA，miRNA，miR)是否存在異常表達(dá)，以期在SLE患者外周血B淋巴細(xì)胞中找出與狼瘡活動(dòng)相關(guān)的miRNA，并觀察其表達(dá)與SLEDAI評(píng)分、血清免疫球蛋白及補(bǔ)體C3水平等的聯(lián)系，探討外周血B淋巴細(xì)胞中miRNA的表達(dá)是否參與系統(tǒng)性紅斑狼瘡的發(fā)病及活動(dòng)。
　　 方法:選取46例SLE活動(dòng)期患者作為研究對(duì)象（稱“活動(dòng)期1組”），另選20名SLE

2、穩(wěn)定期患者和10名健康體檢者分別稱“穩(wěn)定期1組”和“正常對(duì)照組”，采集EDTA抗凝外周靜脈血5 mL，密度梯度離心分離法分離外周血單個(gè)核細(xì)胞，磁珠陰性分選法分離B淋巴細(xì)胞，流式細(xì)胞術(shù)驗(yàn)證B淋巴細(xì)胞純度，根據(jù)TRIzol Regent的操作步驟提取RNA，將每組單個(gè)樣本RNA混成組總RNA，進(jìn)行組間芯片分析，校正后的兩個(gè)樣品間雜交信號(hào)強(qiáng)度的比值＞2或＜0.5代表有明顯的表達(dá)差異，初步篩選SLE活動(dòng)期患者在外周血B淋巴細(xì)胞異常表達(dá)的miRN

3、A。
　　 重新選取選取16例SLE活動(dòng)期和16例SLE穩(wěn)定期患者為研究對(duì)象，分別稱“活動(dòng)期2組”和“穩(wěn)定期2組”.同上方法分離出B淋巴細(xì)胞并提取單個(gè)樣本總RNA，利用stem-loop Real time-PCR技術(shù)對(duì)前期試驗(yàn)篩選出的miRNA進(jìn)行驗(yàn)證。在SPSS17.0軟件上采用獨(dú)立樣本T檢驗(yàn)(Independent-Samples T Test)對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，并分析驗(yàn)證所得差異表達(dá)miRN

4、A與狼瘡活動(dòng)指標(biāo)（SLEDAI評(píng)分、血清補(bǔ)體C3及免疫球蛋白水平）的相關(guān)性。
　　 結(jié)果:芯片分析顯示，與穩(wěn)定期1組比較，共有70條miRNA在活動(dòng)期1組患者外周血B淋巴細(xì)胞存在顯著性差異表達(dá)，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)合不同組間芯片信號(hào)強(qiáng)度的比值大小、已有的相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道及去除影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果因素等方面，從以上70條miRNA中挑出16條作為最終篩選結(jié)果。其中，異常低表達(dá)的包括miR-103、miR-26a、miR-191、miR-150、m

5、iR-17、miR-155、miR-92a、miR-181a、miR-221和miR-222，異常高表達(dá)包括miR-1249、miR-1224-3p、miR-2116-star-st、miR-4258、miR-1915和miR-220b。
　　 對(duì)這16條差異表達(dá)的miRNA經(jīng)stem-loop RT-PCR技術(shù)驗(yàn)證顯示，與穩(wěn)定期2組比較，在活動(dòng)期2組患者外周血B淋巴細(xì)胞中有5條miRNA(miR-191，miR-i03，miR

6、-17，miR-1224-3P，miR-1249)呈低表達(dá);1條miRNA(miR-155)呈高表達(dá)， P值均＜0.05。
　　 數(shù)據(jù)經(jīng)雙變量相關(guān)處理顯示，活動(dòng)期2組患者外周血B淋巴細(xì)胞中的miR-191和miR-155的表達(dá)分別與血清補(bǔ)體C3下降程度與呈正相關(guān)和負(fù)相關(guān);未見(jiàn)活動(dòng)期2組患者外周血B淋巴細(xì)胞中的miRNA表達(dá)與SLEDAI評(píng)分或與血清免疫球蛋白水平之間存在直線相關(guān)性。
　　 結(jié)論:SLE活動(dòng)期患者外周血B淋