蠟梅半胱氨酸合成酶基因CPCysA的克隆分析與表達載體構(gòu)建.pdf

1、植物對土壤中硫的利用包括根系對硫酸鹽的吸收、轉(zhuǎn)運、同化、分配等過程，這個代謝過程由一系列酶和蛋白質(zhì)參與和調(diào)節(jié)。其中，硫摻入到半胱氨酸合成的最后一步反應(yīng)是由半胱氨酸合成酶(OASTL)催化O-乙酰絲氨酸(OAS)和二硫化物(sulphide)完成的。近年來的研究表明，在植物體內(nèi)，硫同化與植物對鎘(Cd)等重金屬元素的脅迫反應(yīng)機制有著密切關(guān)系，研究植物硫同化過程關(guān)鍵酶半胱氨酸合成酶不僅對弄清楚硫吸收過程中多種復(fù)雜的調(diào)節(jié)機制很重要，而且超表達

2、OASTL轉(zhuǎn)基因植株也有重要的實際用途，它們有潛力被應(yīng)用于土壤或水的植物修復(fù)(phytoremediation)，或者在某些條件下可能有適應(yīng)環(huán)境方面的優(yōu)勢，例如，它們對一些重金屬及硫化氫、二氧化硫的耐受力更強。 本文用全長cDNA文庫EST隨機測序的方法獲得了為我國特有的珍貴傳統(tǒng)花木蠟梅的半胱氨酸合成酶胞質(zhì)異形體基因，并進一步作了序列分析和不同組織的表達分析，還構(gòu)建了一個植物表達載體以用于轉(zhuǎn)化植株進行功能驗證，實驗主要工作和結(jié)果

3、如下： 1.在蠟梅花cDNA文庫EST(ExpressedSequenceTag，EST，基因表達序列標(biāo)簽)初步分析的基礎(chǔ)上，選取感興趣的EST進行雙向測序，克隆到全長的蠟梅半胱氨酸合成酶胞質(zhì)異形體基因，命名為CPCysA。(GeneBank注冊號：DQ639764) 2.對CPCysA的序列分析表明，該基因全長為1294bp，其中從103bp到1084bp有一個長981bp完整開放閱讀框，它編碼一個含326個氨基酸的多

4、肽，計算出的分子量為34279Da，5，端有103bp的非編碼區(qū)，3’端非編碼區(qū)有210bp，有重復(fù)的加尾信號AATAA和polyA尾巴。3.BLAST比對發(fā)現(xiàn)它與各種植物半胱氨酸合成酶的胞質(zhì)異形體(OASTL-A)同源性很高，蠟梅CPCysA基因編碼的氨基酸與灰葉煙草、大豆、菠菜、擬南芥的同源性分別達到了88﹪、87﹪、84﹪、81﹪。 4.該序列編碼蛋白質(zhì)與擬南芥半胱氨酸合成酶胞質(zhì)異形體(OASTL-A)的理化性質(zhì)及二三級結(jié)