苯丙氨酸生物合成途徑多酶基因協(xié)同表達(dá)載體的構(gòu)建.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、隨著甜味劑阿斯巴甜（Aspartame，AMP）的生產(chǎn)與應(yīng)用的增加，L-苯丙氨酸（L-phenylalanine，L-Phe）作為其關(guān)鍵生產(chǎn)原料市場需求量大大增加。但國內(nèi)生產(chǎn)尚不能滿足市場需求，主要依賴進(jìn)口。因此利用基因工程手段構(gòu)建L-Phe的高產(chǎn)菌株意義重大。
　　本研究運(yùn)用以下方法構(gòu)建多基因載體以改造大腸桿菌 L-Phe生物合成途徑提高其產(chǎn)量：?克隆磷酸烯醇式丙酮酸合成酶基因ppsA、轉(zhuǎn)酮酶基因tktA及其間隔調(diào)控序列（RBS

2、），構(gòu)建串聯(lián)重組子pZE12-AFPT與pZE12-AGPT；?將質(zhì)粒pTrc-99a-ppsA、pTrc-99a-tktA分別轉(zhuǎn)入感受態(tài) MG△pZE21-AF，得到雙抗性載體；?將質(zhì)粒pZA31-ppsA-tktA轉(zhuǎn)入感受態(tài)MG△pZE21-AF、MG△pZE12-AF及MG△pZE12AFK中，得到含多個基因的雙抗性重組子。
　　通過單因素和正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)優(yōu)化發(fā)酵培養(yǎng)條件，利用SDS-PAGE觀測各酶蛋白表達(dá)量。結(jié)果表明重組質(zhì)

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